湘西辣椒花药离体培养及其再生植株染色体数目的变异.pdfVIP

第 33卷 第 1期 吉首大学学报 (自然科学版) V01．33 No．1 2Ol2年 1月 JournalofJishouUniversity (NaturalScienceEdition) Jan．2012 文章编号 ：1007—2985(2012)01—0081—04 湘西辣椒花药离体培养及其再生植株 染色体数 目的变异 吴光辉 ，黄丽芳 ，蒋建雄。 (1．湘西 自治州农业科学研究所，湖南 吉首 416000；2．湖南农业大学生物科学技术学院，湖南 长沙 410128) 摘 要：利用辣椒花药诱导单倍体研究表明：NTH，MS培养基均能诱导产生愈伤组织和胚状体，但NTH培养基 比MS 培养基培养效果好，以NTH+6一BA0．2mg／L+NAA0．5mg／L+KT1．2mg／L+AgNO。5．0mg／L为愈伤组织和胚状体 诱导的适宜培养基 。通过花药培养获得 的辣椒植株中，具有丰富的倍性变异，经染色体计数鉴定，单倍体( 一12)约 14％， 二倍体 (2n一24)约 46 ，四倍体 (4n一48)约 4 ，各种混倍体 约 36 ． 关键词 ：辣椒 ；花药培养；染色体数 目变异 中图分类号 ：Q243 文献标志码 ：A 辣椒 (Capsicumannuum I．)为常异交植物 ，自然纯合速度慢l】]，常规杂交育种一般要经过 6—7个世 代的连续 自交才能得到相对稳定的后代．而花药培养 只需将 Fl的花药进行培养 ，经染色体加倍可得到纯 合二倍体，即从杂交到得到稳定的纯系．辣椒的花药培养技术开始于 20世纪 7O年代．1973年，王玉英_2]、 George Narayanswamy[3报道通过辣椒花药培养获得了单倍体植株，以后各国学者在辣椒花药培养的 方法和条件上均有新的进展[4叫 ．但花药培养影响因素多，受试验材料基因型的影响显著 ，诱导率偏低 ，操 作难度大等问题，所以辣椒花药培养的研究仍然是一个有意义的课题．本文较系统地对湘西辣椒花药培养 过程中的愈伤组织诱导、再分化 、胚状体的发生、植株再生以及染色体倍性变异等进行了研究，为湘西地区 辣椒新品种选育的高效花药培养体系奠定基础． 1 材料与方法 1．1供试材料 供试辣椒材料为湘西常规种杂交后代 F1，编号为湘辣 22号 ，该辣椒育种材料具有抗病性强、产量高、 商品性好、适应性广等特点．供试材料的花蕾采 自湘西州农科所蔬菜育种基地． 1．2方法 1．2．1花药离体培养 早上 8时以前和下午 5时以后 ，选取花瓣和花萼等长 的花蕾放置在 4℃的冰箱预 处理 2d．在超净作台无菌条件下，将花蕾放在 75 的酒精中浸泡 30S，用无菌水冲洗一次 ，在 0．1 升汞 溶液中表面消毒 15min，然后用无菌水冲洗 5次．最后倾倒在无菌纸上进行接种操作 ，剥离出花药 ，接种 于 MS，NTH(均含 3 蔗糖、5％活性炭和 0．5 琼脂粉)+不 同激素配 比的愈伤组织诱导培养基上．先 在 34℃的恒温培养箱 内暗培养 7d，然后将花药转入24℃左右培养室中培养，每 日补充光照 10h，光照强 * 收稿 日期 ：2011—11—28 作者简介：吴光辉 (1973一)，男，湖南凤凰人，湘西 自治州农业科学研究所助理研究员，主要从事辣椒育种及蔬菜推广 研究． 吉首大学学报 (自然科学版) 第 33卷 度 2000lx左右．培养 6Od后，统计各处理组合的出愈率和出胚率． 将诱导 出的愈伤组织转入 Ms+6～BA0．2mg／L+GA。0．5mg／L+3 白糖+0．596／琼脂粉培养基 上分化．待胚性愈伤组织直接分化出芽后 ，将芽转入无激素 MS培养基上生根 ，4cm左右高时，切成带节茎 段 ，转入 MS+6一BA0．2mg／L+GA。0．5mg／L+3 白糖+0．5％琼脂粉培养基上增殖． 1．2．2染色体计数分析 取试验中所获得的花粉再生植株的幼嫩新根 ，洗净后置于 0．002mol／L8一羟基 喹啉+0．2 秋水仙素处理 3～4h，蒸馏水漂洗数次；放入卡诺 固定液 (无水乙醇 ：冰醋酸一3：1)中固定 24h，蒸馏水漂洗数次；用 1mol／L盐酸溶液酸解 ，在 60℃水浴中