“消癖颗粒”阻断SD大鼠乳腺癌癌变及其对EGFR-STAT3通路影响研究.pdfVIP

·416· 乳腺癌癌前病变篇 防治乳腺癌发生的重要方法之一，“消癖颗粒”是基于这一治法研制的复方制剂，临床研究显示其具有阻 断乳腺癌癌前病变的作用H】。本课题试图通过实验了解其阻断乳腺癌癌前病变的的部分机制，为临床运 用补肾活血调冲任法预防乳腺癌癌前病交提供理论依据。 1．材料与仪器 1．1药物消癖颗粒方提取液：由全国著名中医乳腺病专家林毅教授研制的消癖颗粒方配方煎制而成。方 药组成：淫羊藿、肉苁蓉、郁金等，煎制后药液浓度为29／ml，每克相当于生药量5克。7，12-二甲基苯 钠注射液：丽珠集团丽珠制药厂，批号：080311。 1．2试剂EGFR免疫组化试剂盒、TAT3免疫组化试剂盒均购自武汉博士德生物工程有限公司，批号： 20081 MS．750．SO，LOT：750S808D。 100。ER免疫组化测定试剂盒：NeoMarkers公司产品，REF 电子天平：BS223S， I．3实验仪器电子天平：YP3001N，精度：0．19，上海精密科学仪器有限公司。 精度：0．019，赛多利斯科学仪器(北京)有限公司。荧光成像系统显微镜：奥林巴斯，型号：BX41。 120028． 游标卡尺：上海台海工量具有限公司产品，型号：炉制01 2．方法 烯雌酚的饲料。模型组给予生理盐水，TAM组按4mg／kg／d灌服三苯氧胺，消癖颗粒组按照lO倍成人剂量， 给予lmL／1009灌服药液，2次／日。 2．2标本采集与处理于造模后第26周给药期结束前一天用脱毛剂将大鼠胸部鼠毛去除，给药期结束当日 将动物麻醉，处死实验动物，将颈部至腹股沟备皮后，整块腹部皮肤皮下乳腺组织取下，自乳头部对 半切开乳腺大体观察、计数肿块数量、形态及大小。10％福尔马林固定，在肿瘤明显处和其余各乳腺 结节处取材，组织行石蜡包埋，切片厚度5II111，进行HE染色，光学显微镜下观察，检测不同类型的 病变发生率。 被染成棕黄色至棕褐色的细胞；STAT3阳性表达的细胞为细胞质被染成棕黄色至棕褐色，颗粒状或小块 状染色的细胞；选择有代表性的5个高倍视野，每个视野计算100个细胞中的阳性细胞数，计算上诉指标 阳性细胞率(％)。 意义。 3．结果 3．1第26周大鼠乳腺组织病理检测结果 模型组乳腺组织8例，镜下可见原位癌1例，乳腺浸润性癌7例，乳腺癌发生率为87．5％；TAM治 疗组乳腺组织8例，镜下可见导管上皮一般增生1例，非典型增生4例，纤维腺瘤l例，乳腺浸润性癌 2例，乳腺癌发生率为25％；消癖颗粒治疗组乳腺组织8例，镜下可见乳腺导管上皮～般增生0例，上 皮非典型增生4例，导管原位癌1例，乳腺浸润性癌3例，乳腺癌发生率为37．5％。TAM组、消癖颗粒 组与模型组比较，乳腺癌发生率降低，差异有统计学意义(Po．05)；而TAM组与消癖颗粒组比较差异 无统计学意义(Po．05)。见表l。 乳腺癌癌前病变篇 ·417· 表1第26周大鼠乳腺组织HE病理诊断结果 注：与模型组比较，“·’PO．05。 3．2不同干预组大鼠乳腺组织EGFR表达情况 模型组可见部分上皮细胞EGFR弱表达，平均阳性细胞率21．2％；TAM治疗组6例可见部分上皮细胞 性细胞率与模型组比较，无显著性差异(PO．05)。消癖颗粒组大鼠乳腺组织中EGFR的平均阳性细胞率 与山I组比较无明显差异(P0．05)。见表2。 表2第26周大鼠乳腺组织中EGFR表达表达情况(x±s) 注：与模型组比较，“·’’Po．05。 3．3第26周不同干预组间STAT3蛋白表达情况 达，平均阳性细胞率16．6％。TAM组、消癖颗粒组大鼠乳腺组织中STAT3的平均阳性细胞率与模型组 无明显差异(PO．05)。见表3。 表3第26周大鼠乳腺组织中STAT3表达情况(x±s) 组别 N 剂量 平均阳性细胞率(％) N组 8 一 19．1±9．10