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Smac和Ki67在胃癌组织中的表达及其临床意义 　　作者：陈继红　　作者单位：武汉，湖北省肿瘤医院外科 　　【摘要】 目的 观察Smac和Ki67在胃癌中的表达，并探讨Smac表达与Ki67的关系及其临床意义。方法 应用免疫组织化学法检测71例胃癌组织中Smac和Ki67的表达，分析Smac表达与临床病理因素、预后及Ki67的关系。结果 Smac在胃癌组织中的表达率为71.8%(51/71)，在所有的癌旁组织中均见表达(20/20)。Ki67在胃癌组织中表达阳性率为66.2%(47/71)。Smac表达和Ki67表达与胃癌分化程度、浸润深度、淋巴结转移、TNM分期明显相关(P0.05)。Ki67在Smac表达阴性的胃癌组织的阳性率(17/20)明显高于Smac表达阳性组(30/51，P0.05)。Smac表达阳性患者的生存时间明显长于Smac表达阴性患者(P0.05)。结论 Smac和Ki67可作为判断胃癌组织恶性程度和预后的指标之一，其中Smac的表达与Ki67的表达呈负相关。 　　【关键词】 胃癌 Smac Ki67 凋 增殖 　　胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，在我国的发病率和死亡率均较高，其异常的细胞凋亡和增殖在胃癌的形成和进展中具有重要意义[1]。Smac是2000年在线粒体中发现的一种蛋白，可释放到胞浆中促进凋亡的发生[2]。Ki67是一种与增殖细胞相关的核抗原，是近年研究较多的反映肿瘤增殖活性的蛋白，其与肿瘤的增殖、浸润、转移潜能和预后密切相关[3]。本文旨在观察促凋亡蛋白Smac在胃癌中的表达情况并探讨其表达与增殖相关抗原Ki67的关系及其临床意义。 　　1 资料与方法 　　1.1 研究对象 　　随机收集71例我院1999年1月～2002年6月胃癌手术病例，有完整的临床病理学资料和随访资料，术前均未接受放疗或化疗。患者年龄为24～75岁，平均年龄为54.3岁。其中男47例，女24例。病理结果均经两名以上病理医师确认，按1999年WHO标准分类：腺癌49例，黏液腺癌12例，印戒细胞癌5例，未分化癌5例;肿瘤细胞组织学分化：高中分化38例，低分化或未分化33例。采用1997年UICC第5版胃癌TNM分期：Ⅰ期5例，Ⅱ期25例，Ⅲ期29例，Ⅳ期12例。所有病例获得随访，随访时间8～81月，总体5年生存率为45.1%(32/71)。 　　1.2 试剂 　　鼠抗人Smac/Diablo单克隆抗体(Cell Signaling Technology公司，美国)，兔抗人Ki67单克隆抗体(Lab Vision公司，美国)，即用型SP试剂盒(北京中杉生物公司)，DAB染色试剂盒(北京博奥森生物公司)等。 　　1.3 方法 　　取71例患者手术切除标本存档的石蜡组织块重新制作,4Μm厚连续切片。每份标本常规苏木精伊红染色，进行组织形态学观察和细胞分化程度判断。SP法检测Smac、Ki67的表达。方法简述如下：石蜡切片经二甲苯脱蜡，梯度乙醇水化;柠檬酸缓冲液(pH6.0)95℃修复10min;3%H2O2室温孵育10min，磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗后滴加非免疫性动物血清室温孵育15min，加一抗(抗Smac抗体1∶200，抗Ki67抗体1∶100)，4℃孵育过夜;PBS冲洗后滴加生物素标记二抗37℃孵育10min，辣根过氧化物酶标记抗生物素三抗37℃孵育15min,PBS冲洗后DAB显色，冲洗，苏木精复染，封片，显微镜观察并拍照。每次实验用已知阳性切片作阳性对照，用PBS代替一抗作为阴性对照。另随机选取本研究病例中距胃癌组织边缘至少5cm的癌旁黏膜组织标本(镜下未见癌细胞累及)20份做对照。 　　1.4 结果判定 　　(1)Smac染色的判断标准[4]：以胞浆染为淡黄或棕黄色定义为阳性细胞，随机选择5～10个高倍镜视野(×400)，每个视野计数500个细胞，阳性细胞数30%的组织切片视为阳性标本。(2)Ki67染色的判定[3]：随机选择5～10个高倍镜(×400)视野进行计数，每个视野计数500个细胞，计算Ki67阳性细胞数占总细胞数的百分数，以阳性细胞数20%视为阳性标本。 　　1.5 统计学处理 　　采用SPSS13.0统计软件进行统计学分析，样本间采用Χ2检验，生存率采用KaplanMeier法分析并行Logrank检验，以P0.05为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 胃癌组织中Smac的表达 　　Smac表达于细胞浆内，呈淡黄色或棕黄色分布(图略)。71例中Smac表达阳性者51例，阳性率为71.8%，20例癌旁正常组织均为阳性表达。两者差异有统计学意义(P0.05