Spantide对急性坏死性胰腺炎胰腺肠源性感染治疗作用的研究.docVIP

Spantide对急性坏死性胰腺炎胰腺肠源性感染治疗作用的研究 　　作者：宿士智 作者单位：首都医科大学大兴医院 普外科一区，北京 102600 　　【摘要】 研究P物质受体拮抗剂Spantide能否减少肠道细菌移位的发生﹑减轻胰腺肠源性感染并提高实验动物的生存率。方法:将健康成年SD大鼠随机分为对照组(24只)和实验组(再分为NS、P物质和Spantide 3组，每组34只)。除实验组分别各取10只作48h死亡率观察外，余均于制模成功后8h和16h处死。取末端回肠行病理组织学评分;用放免Γ计数器测定尿液中99m锝亚锡喷替酸(99mTcDTPA)的脉冲数，计算肠黏膜通透性;取胰腺和末端回肠内容物作细菌培养。结果:Spantide组与NS组及P物质组比较，肠黏膜病理学改变明显减轻，胰腺细菌培养阳性率也明显降低(P0.05)。Spantide组48h死亡率明显低于其它两组(P0.05)。结论:使用P物质受体拮抗剂Spantide可明显减轻急性坏死性胰腺炎时胰腺肠源性感染的程度，提高实验大鼠的生存率。 　　【关键词】 急性坏死性胰腺炎 神经激肽1受体 P物质 肠系膜淋巴结 大鼠 SpragueDawley 　　急性坏死性胰腺炎(acute necrotizing pancreatitis,ANP)病情凶险，死亡率高。胰腺及胰周感染是急性胰腺炎的严重并发症，临床上急性胰腺炎死亡的病人中80%是由于胰腺坏死组织继发感染所致。胰腺感染主要是指由移位的肠道细菌或毒素所致的肠源性感染。 　　近年来研究发现，P物质及其受体在急性胰腺炎的发生发展中起到了重要作用[14]。我们以往的研究[35]证实：ANP大鼠肠壁上P物质及其受体表达升高，P物质通过与表达增加的神经激肽1受体(NK1R)结合介导炎症反应，加重肠壁病理损伤，引起肠黏膜通透性增加，加重胰腺肠源性感染。应用NK1R拮抗剂可阻断P物质的作用路径，对ANP急性肺损伤有一定的治疗作用。然而，应用P物质受体拮抗剂能否减轻肠黏膜屏障的损害以及能否减少细菌移位的发生仍不清楚。 　　本实验通过制作ANP大鼠模型，研究P物质受体拮抗剂Spantide对ANP时肠黏膜屏障是否具有保护作用，以及Spantide能否减轻ANP胰腺肠源性感染﹑降低实验动物死亡率等。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验材料 　　健康成年SD大鼠126只，体质量250 280g，雌雄各半，由东南大学医学院实验动物中心提供;P物质、Spantide(NK1R拮抗剂)以及牛磺胆酸钠购自Sigma公司;浓缩型兔抗大鼠P物质抗血清、即用型SABC试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司;亚锡喷替酸(DTPA)购自中国原子能科学研究院同位素所;锝(99mTC)购自中国核动力研究设计院第一研究所。 　　1.2 实验方法及步骤 　　1.2.1 实验分组 将126只大鼠随机分为对照组24只、ANP实验组102只。ANP实验组又分为生理盐水(NS)组、P物质组、Spantide组，每组34只。 　　1.2.2 模型制作 大鼠用3%戊巴比妥钠(按体质量每100g 0.1ml)腹腔注射麻醉后妥善固定，取上腹正中切口，切开腹壁进入腹腔。将十二指肠提出切口，向胰管以恒定速度(0.1ml·min-1)注入5%牛磺胆酸钠(按体质量每100g 0.1ml)，并于近端空肠内缓慢注入100ΜCi 99mTcDTPA(同位素99mTc 标记的大分子物质亚锡喷替酸)。ANP制模后10min，各组大鼠尾静脉相应地缓慢注射NS、0.0025% P物质及Spantide 0.5ml。关腹后向大鼠背部皮下注入NS 4 6 ml。将其放入代谢笼，留取8h和16h尿液。ANP各组分别取10只大鼠用于48h死亡率和生存时间观察，其余ANP各组大鼠分别于8h和16h处死采取标本。 　　对照组仅将十二指肠提出切口，轻轻翻动胰腺3次，然后回纳腹腔，关腹，而不注射牛磺胆酸钠。 　　1.2.3 肠黏膜通透性的检测 99mTcDTPA在体内不代谢，可通过尿液测定其含量。尿液中同位素脉冲数可以间接反映肠黏膜通透性[67],即： 　　肠黏膜通透性(%)=99mTcDTPA排泄率(%)=[(尿液测定值-本底测定值)×总尿量/(药物测定值-本底测定值)]×100。 　　1.2.4 标本采取 称取8h和16h大鼠尿液，用放射免疫Γ计数器测定尿中99mTcDTPA脉冲数。取部分胰腺和回肠内容物分别做需氧菌和厌氧菌培养。切取部分末段回肠组织，留作光镜和电镜检查。 　　1.2.5 肠壁的病理学检查 取末端回肠组织于10%福尔马林溶液及4%戊二醛中固定，分别进行