一种简单的肝细胞分离培养和鉴定方法.pdfVIP

蔷 、簿≯ ’ ： ． 泸州 医学院学报 2003年 第 26卷 第 4期 306 JournalofldlzhoaMedicalCollege Vo1．26 No．4 2003 、 一 种简单 的肝细胞分离、培养和鉴定方法* 谢华福 ，甘 淋 ，李 娟 ，刘晓燕，宋 杰 ，李 洪 (泸州医学院：分子生物实验室 ； 生物化学教研室 ，四川泸州 646000) 摘 要 目的：建立一种简单 的肝细胞分离、培养和鉴定方法。方法 ：取新生大鼠、成年小 鼠的肝组织 ，立 即剪 碎、铜网过滤 ，RPMI一1640培养基培养 ，24小时后换液 ，除去血细胞后进一步培养 ，形态学观察 ，并用 PAS(periodieac． id—Schi~)染色法鉴定。结果 ：在光镜可见分离、培养的肝细胞折光性强 ，呈圆形 ，偶见梭形 ，核大而 圆，具有双核细 胞 ；PAS染色后 ，胞质中布满粉红色糖原颗粒 ，核呈空泡状。结论 ：本实验方法可获得较纯的肝细胞 ，而且操作简便 可行 ，经济实用。 关键词 鼠；肝细胞 ；细胞培养 中图分类号 R34 文献标识码 A 文章编号 1000—2669(2oo3)o4—0306—03 肝细胞形态规整，具有多种重要功能，是生命科 *国家 自然科学基金资助项 目，项 目编号 (7o071o4o) 学研究中最常用的实验材料之一。肝组织细胞构成 以后每 2～3天更换培养基 。 丰富，既有组成肝实质的大量肝细胞与少量 间质细 1．3 不同培养基的比较 胞 ，其血窦中又有大量血细胞 ，尤其以红细胞数量较 在上述方法基础上用 DMEM代替 RPMI～1640 多。因此在体外分离 、培养高纯度肝实质细胞是是 培养基对肝细胞进行对照培养。 进行各项实验研究的前提 ，具有重要的意义。本文 1．4 肝细胞不同培养方式的比较 以研磨 、过滤的方法分离新生大 鼠、成年小 鼠肝细 将分离的肝细胞悬液接种于培养瓶 内后随机分 胞 ，并进行原代培养，最后用 PAS染色染肝细胞胞 为2组：第 l组 ：培养24小时后更换全液，第 2组 ： 质中糖原 以鉴定 ，获得 了数量较多、较纯净的肝细 培养24小时后更换半液 胞 ，为肝细胞体外培养研究奠定了基础。 1．5 培养肝细胞的糖原染色 (PAS染色法) 待肝细胞生长成片后 ，取出盖片，依次进行 0． 1 方 法 9％的生理盐水清洗两次，每次约 3分钟；70％酒精 1．1 试剂 固定约 l0分钟后，PAS染色，封片，镜下观察。 RPMI一1640培养基 (购 自Gibco公司产品)，小 2 结 果 牛血清 (成都市华星生化制品厂)，碱性品红 、偏重亚 硫酸钠 、过碘酸(购 自上海试剂厂)。 2．1 培养肝细胞的活体观察 1．2 肝细胞的分离及培养 肝细胞培养 24小时后在倒置显微镜下 ，可见肝 取新生大 鼠(出生 l～3天