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人Leptin基因在大肠杆菌中的高效表达纯化及其生物学活性研究.pdf
卷 期 生 物 工 程 学 报
! # ’()!*’)#
年 月
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- 12
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人 基因在大肠杆菌中的高效表达、纯化及其生物学活性研究
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赵跃然 王郡甫 游力 高春义 田志刚 张捷 韩娜 尹进 孙
(山东省肿瘤生物治疗研究中心,山东省医学科学院基础医学研究所 济南 )
#2$$6#
摘 要 将人 表达质粒 转化 ,经热诱导获得了目的蛋白的表达。经 鉴
F4GC H##$0IH 340(,#J+!$1 KLK0MNO:
? ?
定分析,表达产物以包涵体形式存在,目的蛋白表达量占菌体总蛋白的 以上。通过包涵体分离,
7$P K4/,.-(
? =
K#$$QR凝胶和 离子交换层析及 柱反相色谱纯化,获得纯度在 以上,内毒素含量小于
L:N:2# Q 4-D(S!5 12P
=?
/ 的高纯度的重组人 。 鉴定表明,纯化表达产物能和抗 抗体特异性结合;蛋白质
!$:T ; F4GC V4DG4-C0A(’G F4GC
U ? ?
端 个氨基酸序列分析结果和预期的序列一致。纯化产物经复性处理,其分子中 和 形成二硫键。
* !2 S D16 S D!76
= =
体内活性检测显示,纯化和复性的 明显抑制 /小鼠的进食和体重增长,提示其具有明显的生物学
-/0F4GC HNFH .
?
活性。
关键词 ,基因表达,大肠杆菌, ,蛋白纯化
F4GC J+!$1
?
中图分类号 文献标识码 文章编号 ( )
R%!5 N !$$$0%$6!#$$!$#0$!20$7
是近年来发现的由肥胖基因( ;其它为进口或国产分析纯试剂。
F4GC IA4D4 WC.)
?
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