生物学实验指导书(2013年10月修订).pdfVIP

实验一 普通光学显微镜的使用及其对微生物一般形态的观察 一、实验目的 1．了解普通光学显微镜的构造及其各部分的作用。 2 ．掌握普通光学显微镜的正确使用和维护方法。 3 ．通过低倍镜、高倍镜观察藻类、酵母培养液和新鲜活性污泥中微生物的一般形态。 二、实验原理 普通光学显微镜由机械部分和光学部分组成。 图 1-1 双目生物显微镜 1．机械部分： （1）镜筒：位于镜臂上端的空心圆筒，是光线的通道。镜筒的上端可插入目镜，下面 与转换器相连。 （2 ）转换器：位于镜筒下端，是一个可以旋转的圆盘。有3~4 个孔，用于安装不同放 大倍数的物镜。 （3 ）载物台：载物台是放置标本的方块平台，中央有透光孔，载物台上面有玻片夹持 器，侧面有移动手轮，可纵向和横向移动标本。 （4 ）调焦手轮：包括粗调手轮和微调手轮，可使载物台上下升降，调节物镜和标本之 间的距离。 2 ．光学部分： （1）目镜：放在镜筒上，配有 10 倍（10×）、16 倍（16×）两种。 （2 ）物镜：装在转换器的孔上，有低倍镜（4 、10）、高倍镜（40 ）和油镜（100），是 显微镜中最主要的部分。各种镜头上都刻有放大倍数和数值孔径（N A ）及所要求盖玻片 厚度等主要参数。物镜的性能由数值孔径决定，并且还依赖于物镜的分辨率。 （3 ）聚光器：由聚光镜和孔径光阑组成。聚光镜的作用是把光线聚集在标本上，增强 照明度。孔径光阑是用来调节对比度的，使物镜和聚光器的数值孔径相符合。当孔径光阑开 启到物镜出瞳的 70~80%时，就可以得到足够对比度的良好图象。如果开得太大，超过物镜 的数值孔径，就会产生光斑；如果开得太小，则分辨率下降，降低物像的清晰度。 1 （4 ）电光源：在显微镜的下部，提供观察标本时所用光源。 三、实验器材 1．普通光学显微镜（双目生物显微镜） 2 ．载玻片、盖玻片若干 3 ．玻璃棒、滴管 4 ．滤纸、擦镜纸 5 ．藻类、酵母培养液，新鲜活性污泥 四、实验方法 １．低倍镜的操作 （１）首先把目镜放入镜筒上，将物镜（4 、10、40 、100）旋紧在转换器上。 （2 ）标本放在载物台上，用玻片夹持器挟紧。并用移动手轮移动所要观察的目的物到 圆孔的正中央。 （３）打开电源开关，调整聚光器，使光路对准载物台中央的光孔，光亮度要适宜。 （４）旋动转换器，将10 倍物镜对准光孔。 （5 ）用粗调焦手轮使物镜与标本距离至最小，同时要侧脸观察，以免压坏标本玻片或 损坏物镜。 （6 ）调节瞳距。 （7 ）眼睛接近目镜观察，左（右）手用移动手轮轻轻移动玻片夹持器，右（左）手用 粗调焦手轮将载物台下移（向内旋转调焦手轮），如果见到目的物，但不是十分清楚，再用 细调焦手轮调节，至目的物清晰为止。 （8 ）如果粗调焦手轮旋得太快，超过焦点，必须从第（5 ）步重调，不要在正视目镜的 情况下调粗调手轮，防止没有把握的旋转使物镜与载玻片相撞碰坏。 注：观察时两眼同时睁开，双眼不感觉疲劳。 2 ．高倍镜的操作 （1）使用高倍镜前，先用低倍镜观察（操作方法同低倍镜的操作）。 （2 ）旋动转换器，换用高倍镜（40 ）观察，如果高倍镜触及载玻片应立即停止旋动， 说明原来低倍镜观察没有调准焦距，目的物没有找到，须用低倍镜重新调节。如果调节正确， 换用高倍镜时基本可以看到目的物，如果模糊，用微调焦手轮稍微调节一下就清晰可见。 3 ．微生物形态观察 取一干净的载玻片，用滴管或玻璃棒在培养液内沾一滴菌液，用干净的盖玻片覆盖在滴 液上（注意不要有气泡）即成标本片，用低倍镜和高倍镜观察。记录微生物的形态特征。 四、实验记录及结果 表 1-1 微生物的形态观察记录 项 目 放大倍数 低倍镜观察 高倍镜观察 五、思考题 1．镜检标本时，为什么要先用低倍物镜观察？ 2 ．画一个细胞结构的示意图。 2 实验二