淋巴囊肿病毒受体蛋白在牙鲆组织中的分布及其黏附蛋白的研究.pdf

淋巴囊肿病毒受体蛋白在牙鲆组织中的分布 及其黏附蛋白研究 摘要 disease，LCD)是一种由淋巴囊肿病毒 鱼类淋巴囊肿病(L)吼phocystis dise鹋e vims，LCDV)引起的鱼类病毒病，其典型症状为引起鱼体 (1ymphocyStis 皮肤和浅表组织的瘤状病变，有时在鳃、肝、脾等组织也发现有瘤状物。该病呈 世界性分布，流行广泛，已知可感染42科140种以上的海水、半咸水和淡水的 野生、养殖及观赏鱼类。该病的爆发致使鱼体丧失其观赏和商业价值，严重时可 造成死亡，给鱼类养殖业造成巨大的经济损失。了解鱼类组织细胞上与LCDV 感染相关的受体蛋白，以及病毒上与细胞受体相互作用的黏附蛋白对阐明LCDv 感染的机制以及该病的防控具有重要意义。 27．8 论文应用本实验室制备的抗牙鲆LCDV kDa受体蛋白的单克隆抗体 牙鲆过程中病毒吸附的生物学基础；并对淋巴囊肿病毒的黏附蛋白进行了初步鉴 定，以期为进一步了解病毒与宿主相互作用的机制提供理论依据。另外对LCDV 27．8kDa受体在大菱鲆中的存在进行了初步的检测，为研究LCDV对鱼类的广泛 性感染提供理论依据。具体研究结果如下： 利用LCDV受体单克隆抗体的间接免疫荧光与免疫组织化学技术，对牙鲆 外周血、白细胞、鳃、胃、肠、表皮、肝脏、头肾、体肾、脾、性腺、脑、心脏 等组织进行了LCDV受体定位观察，发现在牙鲆外周血白细胞、鳃、表皮、胃、 27．8 肠、肝脏、脾及头肾中均有较强的阳性信号，表明有LCDV kDa受体的分 布，这些部位存在介导LCDV吸附、感染牙鲆组织及在组织间扩散的分子基础， 推测LCDV通过与鳃、表皮及消化道上皮的受体结合进入牙鲆体内，通过与外 周血白细胞上的受体结合侵染白细胞而进入血液循环，实现病毒在体内的传播， 进而感染肝脏、脾脏、头肾等器官。 利用LCDV受体单克隆抗体对大菱鲆的鳃、肝、体肾、肠、胃等组织进行 免疫印迹实验，发现在大菱鲆的鳃、肝、胃、肠中均有蛋白条带特异性显色，证 明在大菱鲆中同样分布有LCDV 27．8kDa受体的存在，牙鲆与大菱鲆具有相同的 细胞受体，且受体在体内组织器官中的分布具有很大的一致性。 通过逆向病毒铺覆蛋白印迹技术(VOPBA)对LCDV的黏附蛋白进行鉴定。 膜上，利用病毒的细胞受体蛋白与薄膜共同孵育，通过化学方法显色，显示出能 与受体蛋白特异性结合的病毒蛋白条带。实验最终得到一条能与牙鲆LCDV 27．8kDa受体蛋白特异性结合的32kDa蛋白条带，对该蛋白进行切胶回收后进行 038开放阅 蛋白一级质谱测序，经与基因库进行数据对比，确定该蛋白为LCDV 读框基因所编码。 关键词：淋巴囊肿病毒；受体；免疫组织化学；黏附蛋白 ：Distributionof diseaseVirus in lymphocystis receptor identificationof nounder(P口，。口抛办z魂DZ如口cP“s)and Virionattachment prOteins Abstract aIl ChronicdiseaSecharact西zed L)吼phocystisdiseaSe(LCD)，isimportant by fomation 1esions