猪细小病毒SY99株非结构蛋白NS1基因的克隆与原核表达.pdfVIP

中国农业科学2003，36(¨)：1352—1356 1111111皇g!!!!塑翌!!!!：：! 猪细小病毒SY．99株非结构蛋白NSl基因的 克隆与原核表达 吴 丹1’2，童光志1，仇华吉1，薛强1，周艳君1，李景鹏2 中国农业科学院暗尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验宣，哈尔滨150001；2东北农业大学生物工程系，哈尔滨130030) 摘要：根据猪细小病毒(porcine 大肠杆菌BL21(DE3)中．经IPTG诱导，使PPVNSl基因获得了表达．运用ELISA和Western blotting证实了表达产物 的特异性。经表达产物细胞定位分析，表达的NSl蛋白是以包涵体的形式存在于大肠杆菌中。通过改变诱导时间 或诱导剂1PTG的浓度，确定了表达NSl蛋白的最佳诱导条件：IPTG终浓度为0．6mmol·L，诱导时间为3h，在大肠 杆菌中最高表达含量为17．8％。亲和层析后，得到了纯化的NSl蛋白，在Western blotting检测中，纯化蛋白大大降 低了反应背景。表达曲NSI蛋白可作为免疫诊断试荆来检测PPV的发生，而且还可用干鉴别灭话疫苗免疫猪和自 然感染猪。 关键词：猪细小病毒‘N51 S蝴‘ A Molecularand ofNon—structural Prokaryotic Cloning Expression ProteinNSIGeneofPorcineParvovirus WU Danl”，TONG Hua—jil，XUE Yah-junl，uJing-pen矿 Guang—zhil，QIu Qian91，ZHOU (1HarmVeterinary虽w㈣Institute，Nmwnal研LaboratoryBiotechnology，‰加150001； ofVeteffnary 150030) 2DepartmentofBiotechnology，NortheastAgriculturalUniversity，Harbin of swine isa Abstract：Porcine nile the failure．NSl majoragentscausingreproductive protein parvovirus(PPV)is ofPPVandcallbeusedasa fordifferentiationofvaccinatedanitaalsandinfoctedones．In non．structural reagent protein for recombinant WaSconstructed the NSl bycloning presentstudy，a expres