鹿茸对实验型骨折愈合过程中TGFβ1和BMP2的表达影响.pdfVIP

中 医 药 学刊 Vd．22NO．6 第22卷第6期 004 MEDICINE Jun．2 ARCHIVESOFTRADITIONALCHINESE 2004年6月 CHINESE 鹿茸对实验型骨折愈合过程中 TGF—p1和BMP一2的表达影响 曲兆海1 侯晓峰2 指 导：刘景生教授3 (1．鞍山市中医院骨科，114000，辽宁鞍山；2．丹东市中医院骨科，118000，辽宁丹东； 3．辽宁中医学院附属医院骨科，110032，辽宁沈阳／／第一作者男，1970年生，主治医师) 摘 要：目的：观察应用鹿茸后骨折愈合过程中，TGF—pl、BMP一2的表达变化，以进一步探讨其促进 骨折愈合的机理。方法：将雄性大鼠60只随机分为4组：生理盐水组A、伤科接骨片组B、鹿茸低剂量组C、 鹿茸高剂量组D。按标准模型方法造模，不作任何固定，分笼饲养，术后第2天灌药，于术后7、14、21天分别 将每组处死5只大鼠，取出骨标表。制成切片。测量骨痴厚度，利用免疫组化染色及图像分析测定TGF一目、 BMP一2表达强度。结果：在骨折愈合过程中，实验组和对照组的骨痴厚度及骨痴组织中TGF—B1、BMP一2 的含量存在着差异，实验组和伤科接骨片组的染色峰值出现在第2周，对照组出现在第3周。结论：高剂量 鹿茸能够增加大鼠骨折端骨痴厚度，提高骨折愈合质量，并能增加TGF一8，、BMP一2在骨痴组织中表达，可 能为鹿茸促进骨折愈合的机制之一。 关键词：骨折； 鹿茸；TGF一函； BMP一2 中图分类号：R931 文献标识码：A 文章编号：1009—5276(2004)06—1076—03 骨折愈合是一个较为复杂的生物过程，近年来，对于 组织，置于4％的多聚甲醛溶液4℃环境下固定48h，再 中药促进骨折愈合及对骨生长因子的研究日益深入．鹿 放入15％EDTA溶液中脱钙2周，每3天更换1次脱钙 茸具有生精益血、补髓健骨之功效，对骨折愈合的促进作 液。脱钙完成后。标本经梯度酒精逐级脱水后，石蜡纵向 用有其独特的生物特性，并认为其本身具有多种生长因 包埋，切片，部分切片进行HE染色，部分进行免疫组化 子。本实验以鹿茸为实验药物，采用免疫组化技术，利用 染色。免疫组化染色过程：1)切片脱蜡至水，在室温 计算机真彩色图像分析系统观察其对骨痂中内源性 20℃下置于3％I-Iz02溶液中以灭活内源性过氧化酶，蒸 馏水洗3次，滴加复合消化液5～10min，再滴加正常山 TGF一＆和BMP一2表达的影响，以探讨鹿茸促进骨折 愈合的作用机制。 羊血清封闭液，室温下20℃甩去多余的液体，滴加TGF 1材料和方法 —p】或BMP一2(兔)一抗4℃过液。0．1MPBS洗3次，每 动物雄性SD大鼠60只。体重250±209。 次3分。滴加生物索化山羊抗小鼠IgG，。室温下20分。 药 物鹿茸粉片(北京同仁堂药店沈阳分店)自行 0．1MPBS溶液冲洗。滴加SABC室温下20分， 加工成粉末。伤科接骨片(大连海洋生物制药厂)。5％ 0．1MPBS洗4次，每次5分，滴加新配制的DAB试剂，均 多聚甲醛溶液、15％EDTA溶液、10％戊巴比妥钠溶液