猪皮胶原蛋白的提取及其结构表征.pdfVIP

第30卷第3期 湖北大学学报(自然科学版) VoL30No．3 ofHubei Science) 2008年9月 Journal University(Natural Se：p．，2008 文章编号：1000—2375(2008)03—0287—03 猪皮胶原蛋白的提取及其结构表征 周玉惠，叶正涛，肖立芳，刘海，孙艳斌，胡小方 (湖北大学材料科学与工程学院，湖北武汉430062) 摘要：采用较简便的酶法从猪皮中提取胶原蛋白，通过SDS凝胶电泳、紫外光谱定性分析．证明所 提取胶原蛋白为I型胶原蛋白，计算得分子量约为320 l血利用FTIR、DSC进一步测试，实验结果表明胶原 -● 蛋白具有完整的三螺旋结构，即具有生物活性． 关键词：I型胶原蛋白；猪皮；傅立叶红外；差示量热扫描仪；凝胶电泳 中图分类号：0636．9；Q599文献标志码：A 胶原蛋白是动物体内含量最多、分布最广的细胞外蛋白质，它广泛分布于结缔组织、皮肤、骨骼等部 位，是皮肤、软骨、动脉血管壁及结缔组织的主要成分，起着支撑器官、保护肌体的功能．胶原蛋白是哺乳 动物体内含量最多的蛋白质，占体内蛋白质总量的25％--30％，相当于体重的6％[1]． 一般蛋白质的提取方法分为酸法、碱法和酶法E2,3]．酸水解法迅速而彻底，但色氨酸全部被破坏，丝 氨酸和酪氨酸部分被破坏，且产品得率低；碱水解法迅速且彻底，但含羟基和巯基的氨基酸，全部被破坏 且产生消旋作用(结构变异)；酶提取法对胶原蛋白破坏性小，能更好更完全地得到活性蛋白，但水解不 够彻底． 猪肉产品在我国的肉类中占有主导地位，猪肉生产的过程中伴随产生大量的猪皮副产品，一般猪皮 约占猪总体重的10％左右，这些副产品除一部分用于皮革、食品等行业外，绝大部分都未能很好地加以 利用I-4,5]．因此，如何合理利用猪皮，提高猪皮的附加值，已成为当今国内各肉联企业和科研院所研究的 主要问题，本文中利用较简便的酶提取法从猪皮中提取胶原蛋白，并对提取产物进行了一系列的分析测 试． 1 实验部分 1．1主要仪器和试剂冷冻离心机，冷冻干燥机(宁波新芝仪器有限公司)，电泳机电泳仪(北京六一电 Avatar 370)，新 泳仪器厂)，匀浆机(Warning，UsA)，差示扫描量热仪(TAQlOO)，傅立叶红夕b(Nicolet 鲜猪皮(市售)，胃蛋白酶(1：3000，Sigma)，其他药品均为分析纯． 1．2胶原蛋白的提取胶原蛋白容易受热变性，所以本实验均在低于10℃的条件进行． 1．2．1预处理将新鲜猪皮洗净去除皮下脂肪后脱毛切碎，浸入10％的NaCI溶液中12h，以除去盐 溶性杂质，用去离子水洗涤2—3次，然后加适量水打浆混匀． 1．2．2酶提取预处理过的猪皮浆原料中分别加入0．5 h后，离心(3000 w／w)，控制pH在2—3范围内，酶处理72 r／min)分离取上层清液． 000 r／ 1．2．3盐析在上层清液中加人NaCI进行胶原蛋白盐析，NaCl浓度为2mol／L，离心分离(8 min)，沉淀即为胶原蛋白，然后将胶原蛋白重新溶解于0．5 mol／L的HAc，重复盐析两次． 1．2．4透析纯化干燥将胶原蛋白溶