外源性EGR1瞬时表达对骨肉瘤细胞细胞周期和凋亡的影响.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2011，27(2)：293～299 · 293 · [文章编号] 1000-4718(2011)02—0293一O7 外源性 EGR1瞬时表达对骨肉瘤细胞细胞 周期和凋亡的影响 秦 丽 ， 张惠华 ， 郭淑军 ， 段飞蝶 ， 陈友鹏 ， 梁旭竞 ， 陈小佳 (‘暨南大学生物工程研究所，基因工程药物国家工程研究中心，广东省生物工程药物重点实验室； 暨南大学附属第一医院感染科，广东 广州510632) [摘 要】 目的：获得人早期生长反应 1(EGR1)基因，并在人骨肉瘤细胞中瞬时表达，研究该基因在人骨肉 瘤细胞中的作用，并探讨其可能的作用机制。方法：以人胎盘组织为模板，巢式PCR(nestPCR)扩增获得EGRI全 长基因，克隆入真核表达载体pcDNA3．1(一)，酶切、PCR鉴定并测序正确后，命名为pcDNA—EGRI。脂质体法将 重组载体转染人骨肉瘤细胞 U2OS，实时荧光定量PCR(qPCR)和免疫印迹检测 目的基因的表达 ；MTr法检测细胞 生长和增殖情况；流式细胞仪和DAPI染色检测细胞的周期变化和凋亡情况 ；qPCR检测细胞中与细胞周期 、凋亡相 关基因的表达变化情况；短发夹RNA(shRNA)干扰EGRI后 ，检测细胞的变化情况。结果：成功获得了人EGR1基 因并构建了其重组表达载体 pcDNA—EGR1。EGR1可有效地在 U2OS中瞬时表达；可显著抑制细胞增殖(P 0．05)，并呈一定的剂量依赖。EGR1可引起细胞周期停滞于G0／G，期，并促进凋亡率增加(Po．05)。EGR1可引 起细胞核出现明显的固缩和凋亡表型。EGR1可引起周期相关基 因表达下调，凋亡相关基 因表达则显著上调。 shRNA干扰EGR1后，细胞凋亡表型和EGR1所调控的相关基因表达水平与对照组一致。结论：EGR1具有抑制骨 肉瘤细胞增殖作用 ，能调节骨肉瘤细胞周期和凋亡相关基因的表达 ，从而促进细胞周期停滞和凋亡率的增加。 [关键词】 基因，早期生长反应；瞬时表达；骨肉瘤细胞；生长抑制 [中图分类号] R363 [文献标识码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2011．02—016 Transientexpression ofexogenousEGR1affectscellcycleand apoptosis in humanosteosarcomacells QINLi，ZHANGHui—hua，GUOShu—jtin，DUANFei—die，CHENYou—peng， UANGXu—iing，CHENXiao—iia (BioengineeringInstituteof MnUniversity，NationalEngineeringResearchCenterofGeneticMedicine，GuangdongPro— vineialKeyLaboratoryofBioengineeringMedicine；DepartmentofInfectiousDiseases，TheFirstAffiliatedHospital，Jinan University，Guangzhou510632，China．E—mail：tchenxj@jnu．edu．cn) [ABSTRACT] AIM：Toobtainthegeneofhumanearlygrowthresponse1(EGRI)andtostudyitsfunctionby transientexpressionofEGRIinhumanosteosarcomacelllineU2OS．M ETHODS：Total RNA wasextractedfrom human placentanadreversetrnascriptionoftheRNA tocDNA was performed．ThewholelengthofEGR1cDNA was isolatedby nestPCRandclonedintopcDNA3．1(一)