牛传染性鼻气管炎病毒DQ株gD基因表达及其间接ELISA方法的建立和初步应用.pdfVIP

ChineseJournalofVeterinaryMedicine 中国兽医杂志 2011年(第 47卷)第 2期 3 牛传染性鼻气管炎病毒 DQ株 gD基因 表达及其间接 ELISA方法的建立 和初步应用 董华兴 ，侯喜林 ，谢金鑫 ，张佩鑫 ，柳 强 ，刘 鹏 ，王延涛 ·(黑龙汀八一农垦 大学动物科技 学院 ，黑龙 江 大庆 163319) 摘要 ：以原核表达 的牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)重组 gD蛋 白作为包被抗原，建立检测 IBRV抗体 的间接 ElISA方 法 。构建 pET30a—gD重组质粒 ，在大肠杆菌 中表达 IBRV重组 gD蛋 白，Western—blot检测该重组蛋 白具有 良好的免疫活性 。 通过方阵试验确定了抗原的最适包被浓度为 2．5~g／mI，血清最佳稀释倍数为 1：200，酶标二抗最佳稀释倍数为 1：5000， 与病毒 中和试验 、全病毒 EIISA方法的检测结果符合率分别为 87．5 、92．5 。用该法对黑龙江部分地区采集到 的863份牛 血清样 品进行检测 ，结果 阳性率为 82．27 。本试验建立 的间接 ElISA方法可用于 IBR的检测和流行病学调查 。 关键词 ：牛传染性鼻气管炎病毒 ；重组 gD蛋 白；间接 EIIsA；抗体检测 中图分类号：$852．659．6 文献标识码 ：A 文章编号2011)02—0003—03 Establishmentandpreliminaryapplicationofan indirectELISA assay to detectantibodiesagainstIBRV—DQusingexpressedgD proteins DONG Hua—xing，HoU Xi—lin，XIEJin—xin，ZHANG Pei—xin， LIU Qiang，LIU Peng，WANG Yan-tao (CollegeofAnimalScienceandTechnology，HeilongjiangAugust—FirstLand ReclamationUniversity，Daqin：g 163319，China) Abstract：AnindirectELISA wasdeveloped to detectantibodiesagainstIBRV usingrecombinantgD proteinofinfectiousbovinerhinotracheitisvirus(IBRV)．Theprokaryoticexpressionsystem ofpET30a— gD expressingtheIBRV recombinantgD proteinswasused．W esternblotwasemployed to detectthere— combinantproteins． Through thematrix experiments，theoptimalcoating antigen concentration was 2．5t*g／mL，andtheoptima1serum dilutionwas1：200。an(itheoptimaldilutionofHRP—labeledrabbitanti— bovineIgG was1：5000．IncomparisontotheVN TestandthewholevirusELISA ，theagreementrateof gD—ELISA is87．5 and92．5 ，respectively．The863serum samplesfrom Heilongjiangprovincewere detectedbythisassay．Thepositiveratewas82．27％．ThisELISA canbeusedforepidemiologicalsurvey forinfectiousbovinerhinotracheitjs． Keywords：IBRV ；reco