细胞培养中支原体污染的去除.pdfVIP

维普资讯 铷 一 ·426· ／ 中华微生物学和免疫学杂志 t995年 12月第 15卷第 6期 细胞培养中支原体污染的去除 弓7 锐 足／ ／．玛 在运用细胞培养手段的生物学研究和生物工程产 品中，支原体 污染仍是一个颇为棘手 的问题。11株人的细胞 §Pe—A1、K562、HUT一102、BT一325、6T—CEM、NKM一45、CNE、HL一6O、QGY一7701、QZG、人羊膜细胞I3株小鼠细胞 P388 YAC一1、P815El株绒猴细胞 B95—8；和一株杂交瘤QKT3等，已污染了支原体的细胞经MC一2101~／g／ml处理 ?天 ，支原体悸染全部转阴性 。去除了支原体的细胞株经一年的培养 、传代、冻存复苏 ，多次支原体检测始终阴性 。对 去除了支原体 的SPC—A1、K562、HUT一102、B95—8等细胞株测试了其相关特性 ，均未见受影响。^为用 I：1腔支原体 、 猪鼻支原体、精氮酸支原体分别感染小鼠骨髓瘪 spz／o~ 洲绿猴 肾细胞株 Vero．然后经 MC-210~ ，支原体全 部去障，且不影响Sp2／0在制备杂交瘪时的融合率和抗体的分泌。 关键调：细胞培养f支原体}去除I坚 10 ●■。___ ‘_… 1956年Robinson等。首次报道细胞培养 原先枵染的支原体 。 中的支原体污染以来 ，支原体污染一直是细胞 材料和方法 培养中颇为棘手的问题 。培养细胞的支原体污 染率在4 ～92 不等。，一般没有明显的细胞 1．支原体株及其培养基 ；同前徊。 2．细胞株及其培基 ：除6T~CEM 直接从 ATCC引 损伤，不易被察觉 ，对细胞株、杂交瘤等的生长 进 ，其余为中国科学院细胞库保存的细胞株 细胞培基 和功能特性有广泛、多样的损害，直接影响了研 除Vero用DMEM+20 新生小牛血清 ．其余均为RP— 究工作、临床医学 以及生物制品的效果和可靠 MI1640-~-20％新生小牛血清。 性 。 3．细胞培养袖支原体污染 的检测；同前∞，采用支 迄今 ，已发表了范围宽广的去除支原体污 原体营养肉汤培养法和应用指示细胞的 DNA荧光染 染的方法。，包括把杂交瘤接种在小鼠腹腔 “， 色法 。以肉沥培养和荧光染色 同时阴性为检测结果阴 把肿瘤细胞接种到裸鼠体内，用5一溴尿嘧啶和 性I肉汤培养阳性而荧光染色 阴性为支原体污染阳性 | 可见光诱变损伤支原体 的染色体 ，在培养基中 肉汤培养和荧光染色都阳性为支原体污染强阳性 。 添加抗支原体的抗体 ，使用抗生素等等。这些方 4．细胞株的支原体感染 ：把对数期生长浓度约为5 法都有一定的使用范围，还不能达到普遍、广泛 ×10~CFU ／ml的支原体0．5ml接 种于对 数期生长．浓 、 度约为2×10s／m!的无支原体污染 的细胞株 (3m1)。常 使用的 目的。即使是 Bochringer产品，专 门用于 规培养传代后检测．以支原体污染强阳性 (++)为感 去除培养细胞的支原体枵染的制剂 BM—cyc~n 染成功，用原细胞株作 阴性对照。