11.基因表达.ppt

真核基因表达调控Regulation of eukaryotic gene expression 基因表达 (gene expression) Genomics --DNA --sequencing 3×109 bp 扫描分析结果 从50－200mg组织或细胞、体液中抽提蛋白质 ↓ Cy5和Cy3两种不同颜色的荧光分子 分别标记两个样品 ↓ 洗去多余的标记分子 ↓ 与芯片杂交孵育 ↓ 扫描分析结果 一、原核基因表达调控 Regulation of prokaryotic gene expression 1961年，Jacob 和 Monod 提出。 操纵子(operon)： 由功能相关的一组结构基因 (structural genes) 串联在一起，包括上游的调控区共同构成。 （一）真核细胞基因组的特点 1. DNA量大：与蛋白质结合形成染色体，储存于细胞核内。 微卫星不稳定性的研究方法 （二）转录前水平的表达调控 发生在基因组水平上的基因结构的改变。 1. 基因丢失 2. 基因扩增 3. 基因重排 4. 甲基化修饰 5. 染色质结构 1. 基因丢失 体细胞分化过程中，必须将某些基因永久性关闭。 最简单有效的方式－－－将这些基因丢失。 将要分化为生殖细胞的细胞则一直保留着整套基因组。 2. 基因扩增 发育分化、环境条件的改变，对某些基因产物的需要量急剧增加－－增加该基因的拷贝数。 非洲爪蟾卵母细胞(200万个)中rRNA基因(rDNA)的拷贝数为体细胞 (500个)的4000倍。 扩增→1012核糖体。无扩增→500年。 多数人认为是基因反复复制的结果。 不适当的基因扩增，可导致肿瘤的发生。 基因组扩增: 肝细胞的基因组是通过多倍体扩增的。 成人肝细胞4倍体占60％。 这些多倍体细胞的代谢极其活跃。多倍体可能有益于连续产生大量的蛋白质和酶。 3. 基因重排 某些基因片段改变原来 存在的顺序重新排列组合。 如：Ig由2条相同的轻链 （λ或κ）和2条相 同的重链（H）组成。 人类分别由位于22、2和14号染色体的λ、κ和H基因编码。 κ基因由可变区（V，200种）、连接区（J，4种）和不变区（C） 3部分组成。 H区由高变区（V，200种）、可变区（D，10种）、连接区（J，4种）和不变区（C）组成。 表观遗传学的研究方法DNA甲基化 甲基化敏感性内切酶-PCR 基因组DNA 内切酶（甲基化敏感性/非敏感性）酶切 PCR Both HpaⅡand MspⅠcleave at CCGG sites. However, HpaⅡ does not cut the DNA when the internal C is methylated, and MspⅠ digests the DNA regardless of methylation status. 甲基化特异性PCR 亚硫酸盐修饰基因组DNA 甲基化特异性/非特异性引物 PCR 序列分析 Bisulfite treatment converts unmethylated but not methylated cytosine into uracil. 反式作用因子家族 （2）AP1家族 c-Fos、c-Jun 亮氨酸拉链 第三信使 （3）STAT家族