BD流式原理及应用.ppt

TO HELP ALL PEOPLE LIVE HEALTHY LIVES 成立于1897年 位居财富周刊500强的大型跨国公司 产品涵盖诸多医疗领域 BD Biosciences生物科学系统(全球最大的流式细胞仪生产商/供应商) 注射器产品系列：疫苗注射器 临床标本采集系统 感染性疾病诊断系统 在中国各大城市设有代表处 市场情况 1973年世界第一台商品化的流式细胞仪FACS I由BD公司和美国斯坦福大学共同研制成功 1980年北京师范大学引进了中国的第一台流式细胞仪FACS II BD是全球最大的流式细胞仪生产商和供应商，在全球的占有率为75%，在中国75% 在全国各大医院和科研院所，大部分为BD公司的仪器，总计数量已超过700台， 如:清华，北大，中科院，军科院等等 BD公司流式细胞仪 流式细胞术概述 流式细胞术的基本概念 流式细胞术（Flow Cytometry, 简称FCM）是一种可以快速、准确、客观，并且能够同时检测快速直线流动状态中的单个微粒（通常是细胞）的多项特性，并加以定量的技术，同时可以对特定群体加以分选 研究对象为生物颗粒，如各种细胞、微生物及人工合成微球等 研究的微粒特性包括多种物理及生物学特征，并加以定量 流式细胞仪的检测范围 细胞结构 细胞大小 细胞颗粒度 细胞表面面积 核浆比例 DNA含量与细胞周期 RNA含量 蛋白质含量 细胞功能 细胞表面/胞浆/核的特异性抗原 细胞活性 细胞内细胞因子 酶活性 激素结合位点 细胞受体 流式细胞仪的原理 散射光信号 散射光信号 外周全血细胞散射光双参数点图（红细胞溶解后） 流式细胞仪的检测信号 荧光信号 使用荧光标记的单克隆抗体染色，做多色分析 荧光信号的强弱，反映了细胞抗原的表达含量 荧光信号 数据分析 数据显示: 直方图 ( Histogram ) 二维点图(Dot Plot) 等高线图(Contour Plot) 密度图 (Density) 三维图（3D Plot）等 单参数直方图分析 数据分析 多参数散点图分析 数据分析 等高图和密度图分析 数据分析 三维图分析 流式细胞仪的应用 流式细胞仪的临床应用 流式细胞仪的科研应用 免疫功能研究 血小板分析（心脑血管疾病） 细胞周期和倍体分析 细胞凋亡 干细胞研究 树突细胞研究 肿瘤相关基因表达的研究 抗肿瘤药物作用机制以及多药耐药性的研究 放疗/化疗疗效的研究 流式细胞仪的应用（免疫） 淋巴细胞免疫分型 淋巴细胞亚群分析 CD4绝对计数 HIV与SARS的诊断与研究 淋巴细胞CD4/CD8分析 CD4绝对计数 T细胞活化 淋巴细胞亚群分析 使用经荧光素标记的特异单克隆抗体，进行多色染色，同时分析淋巴细胞膜上多种白细胞分化抗原（CD分子）的表达，可以将淋巴细胞亚群区分开，进行定性分析 各淋巴细胞亚群的百分含量 淋巴细胞亚群的绝对计数，进行定量分析 淋巴细胞亚群分析 根据功能，淋巴细胞主要分为 B淋巴细胞（CD19+），与体液免疫有关 T淋巴细胞（CD3+），与细胞免疫有关 总T和总B可以用来判断某些免疫缺陷和自身免疫性疾病 NK细胞（CD3-CD16+56+），行使免疫监控功能，? 能够介导对某些肿瘤细胞和病毒感染细胞的细胞毒性作用。 淋巴细胞亚群分析 根据CD4、CD8表达，T淋巴细胞又分为 T辅助/诱导细胞（CD3+CD4+） T抑制/细胞毒性细胞（CD3+CD8+） Th/Ts 评价那些自身免疫失调、被怀疑是免疫失调或已知患有免疫缺陷的病人的免疫状态 临床意义——判断病人的机体免疫状态 诊断原发性免疫缺陷病（如先天性无 r 球蛋白血症）或继发性免疫缺陷病（如AIDS） 造血干细胞移植后免疫重建（6个月NK?；9个月T、B?） Th/Ts?：机体免疫功能亢进：自身免疫性疾病，如SLE、类风湿性关节炎等（治疗有效恢复正常） Th/Ts?：机体免疫功能低下：AIDS、病毒感染、慢性活动性肝炎和活动性肝硬化、再障、结核、肿瘤等 移植后动态免疫监测： 急排临床症状出现前1-5天，活化T和Th/Ts持续?，1.2预示急排； Th/Ts持续?表明可能感染，比值1.08，可能性大，0.2应停用免疫抑制剂； 实体肿瘤疗效和病人免疫状态观察 治疗前常伴T? 、Th/Ts?，放/化疗有效可恢复； 淋巴细胞免疫表型正常或治疗后能恢复正常者预后常较好； 探索疾病发病机理、进程和预后（炎症、肿瘤） 淋巴细胞亚群双色分析 AIDS 病人T亚群分析 先天性无 r 球蛋白血症 乳腺癌患者T淋巴细胞亚群变化 TriTEST/MultiTest与T淋巴细胞绝对计数 使用三色试剂或四色免洗试剂 样本使用EDTA抗凝全血，用血量50uL 免洗操作，减少细胞丢失 绝对计数TruCOUNT管预先加有已知数量微球，在流式细胞