多重RT—PCR区分PRRSV变异株和经典株方法的建立.pdfVIP

金 陵 科 技 学 院 学 报 CoL26，No．2 第26卷 第2期 2010年6月 JoIJIiNAI，OFⅡN】 SⅡ-兀玎1[!OFTECHNOLOGY June，2010 多重RT—PCR区分PRRSV变异株和经典 株方法的建立 张志成h，范红结 ，陈钟鸣 ，戴鼎震 ，何小明 (1．金陵科技学院动物科学与技术学院，江苏 南京 210038；2．南京农业大学动物医学院，江苏 南京 210095) 摘 要：根据GenBank发表的猪繁殖与呼吸综合征病毒经典株和变异株基因序列，设计合成了2对引物，分别扩 增NSP2和NSP9部分基 因片段 ，建立 了一种一次反转录后多重PCR鉴定区分PRRSV变异株和经典株 的方法。 该方法扩增PRRSV变异株时可获得 380bp的特异性片段，扩增PRRSV经典株时则获得380bp和 680bp两条 特异性片段，根据RT—PCR产物可将两者区分开来。试验证明该方法具有敏感性高、特异性好的特点，是一种快 速准确检测PRRSV 的方法 。 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒；变异株；经典株；多重RT—PCR 中图分类号：$855．3 文献标识码 ：A 文章编号：1672—755X(2010)02--0O85一O4 UsingM ultipleRT—PCR toDistinguish between Variant StrainsClassicaiStrainsofPorcineReproductiveand RespiratorySyndromeVirus(PRRSV) ZHANGZhi—cheng ，FANHong—jie，CHEN Zhong—ming ，DAIDing-zhen ，HEXiao-ming (1．JinlingInstituteofTechnology，Nanjing210038，China； 2．NanjingAgriculturalUniversity，Nanjing210095，China) Abstract：BasedonGenBank’Sstrainsgenesequenceofclassicalandvariantstrainsofporcine reproductiveandrespiratory syndromevirus，twospecificprimersweredesignedandpartsof gene fragmentsofNSP2andNSP9wereamplifiedrespectively．Afteronereversetranscrip— tion，a multiple PCR method wasestablished tOdistinguish variantand classicstrainsof PRRSV．Thismethodwas shown to gain 380bp specific fragmentsby amplifying variant strainsofPRRSV orgaintwo380bpand680bpfragmentsbyamplifyingclassicalstrainsof PRRSV，andtheproductsofRT—PCR couldbeusedtOdistinguishthem．Itwasprovedtobea fastandaccuratemethodofdetectingPRRSV，whichhadhighsensitivityandgoodspecificity． Keywords：PRRSV ；variantstrains；classicalstrains；multipleRT—PCR 猪繁殖与呼吸综合征病毒 (Porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus，PRRSV)为动脉炎 病毒属 的成员，是一种有囊膜 的单股正链RNA病毒，病毒粒子呈球