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饲料中真蛋白的测定方法 1.前言 饲料作为畜牧养殖生产中的重要生产资料，其营养价值的高低直接影响到畜牧养殖的效 益，而饲料中蛋白质的含量是一项重要的指标，饲料中粗蛋白质包括真蛋白质和非蛋白质两 部分含氮物质，后者主要包括游离氨基酸、硝酸盐、铵盐等，故不能反映出饲料蛋白质对动 物的真正营养价值。有些不法生产商故意添加硫酸铵、尿素等非蛋白质来提高产品的粗蛋白 含量，导致部分养殖场户存在一个误区，认为标签上标注的粗蛋白质高，营养价值就高，从 造成养殖效益的低下。本文在凯氏定氮方法的基础上进行相应的前处理从而达到测定真蛋 白的目的。 蛋白质经沸水提取并在一定碱性条件下，能与硫酸铜发生盐析作用而析出沉淀，此沉淀 物不溶于热水，而非蛋白氮则易溶于水，用热水洗沉淀，将水溶性含氮物洗去，剩下的沉淀 物再用凯氏定氮法测定，得出真蛋白质的含量。 2.实验部分 2.1 仪器与试剂 粉碎机、40目分样筛、分析天平（感量0.1mg）、烧杯250ml、玻璃棒、漏斗(直径10cm)、 定性滤纸 （中速，12.5cm，15cm)、可控温干燥箱、K1100F全自动凯氏定氮仪、SH420石墨消 解炉、可控温电炉 浓硫酸 （98%）、硫酸铜(分析纯)、硫酸铜溶液(10%)、硫酸钾、氢氧化钠溶液 （40%）、氢 氧化钠溶液 （2.5%）、硼酸 （20g/L，按混合指示剂：硼酸=1:100加入指示剂）、甲基红-溴甲酚 绿混合指示剂(1:5)、硫酸标准溶液（C （1/2HSO=0.1011mol/L)、氯化钡溶液 （5%）2 4 2.2 实验过程 2.2.1前处理 将风干饲料样品用饲料样品粉碎机粉碎，通过40目（孔径0.45mm）筛，制得分析饲料样 -1- 本，备用。 准确称取约0.5g试样（精确至0.0001g）置于250mL烧杯中，加75mL蒸馏水，加热至沸。， 煮沸30min，加入2.5%氢氧化钠溶液20mL，10%硫酸铜溶液20mL，用玻璃棒充分搅拌均匀， 微沸一段时间，冷却放置超过2 。用定性滤纸过滤，然后用70~80℃热水冲洗沉淀5次以上， 用5%氯化钡溶液5滴和数滴盐酸检查滤液，直至不生成白色硫酸钡沉淀。将沉淀和滤纸放在 65℃烘箱烘干。（共称取9个样品，4-9经上述沉淀处理，8号样品添加0.0636g尿素，9号样品 添加0.1135g硫酸铵；1-3号样品不做沉淀处理直接消化） 2.2.2 消化 将干燥后的沉淀连同滤纸一起放入消化管中，加入15mL浓硫酸，3g硫酸钾，0.2g硫酸 铜，放在石墨消解炉上设置温度梯度升温消化 （同时做空白试验）。 升温程序： 阶段 温度℃ 时间 min 1 200 30 2 320 30 3 400 90 消解完成后，冷却，待上机。 2.2.3 测试 将冷却后的消化管置于K1100F全自动凯氏定氮仪上，设置参数：硼酸20mL，碱 60mL， 稀释水10mL，蒸馏5min。依次做空白及样品，结果自动计算，打印。 3.结果与讨论 3.1 样品空白消耗滴定酸的体积 样品空白 1 2 3 平均值 -2- 消耗滴定酸体积mL 0.5826 0.5376 0.5058 0.5421 3.2 饲料中粗蛋白的测定 样品编号 质量（g） 粗蛋白含量（%） 平均值（%） 1 0.5336 15.6215 2 0.