马铃薯多酚氧化酶基因克隆及反义表达载体构建.pdfVIP

西北植物学报 2003，23(1O)：l745～1749 ActaBot．Borea1．一Occident．Sin 文章编号：1000—4025(2003)10—1745—05 马铃薯多酚氧化酶基因克隆及 反义表达载体构建 王 清 ，王 蒂 ，黄俊生。，郭安平。 (1甘肃农业大学 农学院，兰州 730070；2中国热带农业科学院 生物技术国家重点实验室 ，海 口571101) 摘 要 ：从甘农薯 l号马铃薯试管苗叶片中提取总DNA，根据Genebank报道的马铃薯多酚氧化酶基因(POT32) 序列，设计合成了带有 BamHI、SacI特定酶切位点的 2对特异引物 ，通过PCR获得 l840bP和 476bP的扩增产 物。测序结果表明，1840bp的扩增产物与Genebank中发表的序列一致 ，476bp的扩增产物正是欲扩增 的马铃薯 多酚氧化酶基因的同源片段 。将2个扩增产物反 向连接到表达载体PC。中，通过双酶切鉴定后，按直接导人法实现 反义基因表达载体质粒向农杆菌EHAlO5的导人 ；并经PC R鉴定证明，此质粒 已整合到农杆菌n 上。 关键词 ：马铃薯；PIK)基因克隆；反义基因表达载体构建 中图分类号 ：Q943．2；$532 文献标识码 ：A Cloning ofpotato polyphenoloxidasegeneand constructing ofantisensePPO expression vector WANG Qing ，WANG DiH ，HUANG Jun—sheng ，GUO An—ping (1AgronomyCollege，GansuAgriculturalUniversity，Lanzhou730070，China；2NationalLaboratoryforAgrobiotechnology，Chi naTropicAgriculturalScientificConstitute，Haikou571101，China) Abstract：Inpresentstudies，thegeneralDNA wasextractedfrom thepotato leavesof “GannongNo．1”． TwopairsofspecialprimerweredesignedaccordingtoPOT32sequencebyGenebankpublished，andtwo amplificationproductswereobtained (oneis1840bp，anotheriS476bp)．Anti—directlinkedthem tothe PC3expressionvector，andcheckedthem with twoenzymescutting．Thenmadetheanti—senseexpression vectorintoAgrobacterium EHA105bythemethodofdirectingtranslation．Theconclusionwasthatvector havebeenintoEHA105． Keywords：potatoes；polyphenoloxidasegeneclone；anti—senseexpressionvectorconstruction 成熟果实和蔬菜在贮藏及加工过程 中出现的褐 内外学者进行了一系列研究，最常采用的方法就是 化现象是食品及食品加工业急待解决的一个 问题。 在加工过程中使用化学添加剂来改变酶的结构或使 由于褐化 ，引起产 品感官不佳 ，口感不 良，从而影 响 酶失活或产生竞争性抑制作用 ，以达到降低产品褐 加工产品的品质和价格，导致消费者购买欲下降；而 化程度 的 目的L1]。 加工产品销售踯躅 ，又会引起产品积压 ，造成恶性循 以往 ，马铃薯加工过程 中常常采用亚硫酸盐来 环 。针对果实贮藏及Duq--过程 中的酶促褐化 问题 ，国 抑制褐化 。但近年