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骨桥蛋白及其在动脉粥样硬化中的作用 　　作者：崇爱国，刘伏元 作者单位：安徽医科大学附属省立医院心内科，安徽 合肥 230001 　　【关键词】 骨桥蛋白；动脉粥样硬化；诊断 　　骨桥蛋白(osteopontin，OPN）是细胞外基质中一种重要的糖蛋白，骨组织中大量存在，其他组织中也有少量的表达，但正常血管壁中几乎不表达。1986年以前曾被称为早期T淋巴细胞活性1（early T lymphocyte activation，Eta-1）、分泌性磷蛋白1（secrected phosphoprotein 1，SSP-1）、骨唾液酸蛋白1（bone sialoprotein 1，BSP-1），自从被命名为OPN以来，已相继克隆了大鼠、小鼠、猪、牛、鸡和兔的OPN cDNA。近来研究发现在血管壁动脉粥样硬化处的内皮细胞和平滑肌细胞内OPN mRNA呈高表达状态。它在动脉粥样硬化中的作用己经引起人们的关注。本文就OPN及其在动脉粥样硬化中的作用作一综述。 　　1 骨桥蛋白的结构特征 　　由于来源的生物种系不同，OPN由264-314个氨基酸残基组成，其中天冬氨酸、谷氨酸、以及丝氨酸残基所占的比例较高。OPN中含有单糖链，既有N-糖基化位点，又有O-糖基化位点。OPN具有以下结构特征：（１）精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸（RGD）序列：RGD序列可与细胞表面整合素受体 avΒ、avΒ 3、avΒ 5等结合，介导糖蛋白与细胞间的粘附过程。有研究表明：过度表达OPN的乳腺癌细胞经淋巴管侵润明显增强，失去RGD序列后可部分消除此现象[1]，RGD序列具有高度保守性，一旦变异或缺失将丧失其促粘附的功能；(2）凝血酶裂解位点：OPN能够被凝血酶水解成两个大小不同的肽链，此酶作用位点在RGD序列竣基端第6位氨基酸残基所形成的肽键。研究证明，与完整的OPN分子相比，被凝血酶裂解后含有RGD序列的N末端片断促进粘附的功能反而加强，而缺乏RGD序列的氨基片断其粘附能力减弱；(3）基质金属蛋白酶（MMP）作用位点：目前发现在OPN分子中存在3个MMP上的酶切位点和2个MMP-7的酶切位点[2]。与凝血酶的功能相似，OPN经MMP-3或MMP-7酶切以后其诱导巨噬细胞迁移的功能明显增强；(4）非RGD细胞粘附位点：在骨桥蛋白的羧基末端序列中，还有一段非RGD的细胞粘附位点，OPN以非RGD依赖方式与细胞表面CD44结合而发挥细胞信号分子的作用，其主要与细胞免疫有关[3]；(5）钙离子结合位点：酪氨酸蛋白激酶Ⅱ、蛋白激酶C等能催化骨桥蛋白分子中丝氨酸和苏氨酸残基发生磷酸化，磷酸化的OPN可与多个Ca2+结合在一起。 　　2 骨桥蛋白的组织分布 　　正常情况下，OPN主要存在于骨组织中，但是在病理过程中，许多种细胞可以产生OPN，如：内皮细胞、巨噬细胞、平滑肌细胞(SMC)成纤维细胞、活化的T淋巴细胞和自然杀伤细胞（NK）等。在正常的动脉壁OPN表达甚微或几乎不表达，但是Cherida等人用免疫组织化学染色（immunohistochemical staining）发现在动脉粥样斑块处的泡沫细胞中或者钙化的部位OPN表达明显增加[４]，人主动脉粥样硬化斑块中的巨噬细胞、平滑肌细胞、内皮细胞都可以表达OPN mRNA及合成OPN。内皮细胞、平滑肌细胞、成纤维细胞与OPN的作用依赖于RGD和Ca２+，抗 avΒ 3抗体可部分阻滞这些细胞向OPN迁移。近来研究表明，OPN作为一个细胞因子调节细胞功能而参与组织修复和炎症过程[５]，研究发现在疾病和组织损伤引起的炎症部位OPN的水平增高。 　　3 骨桥蛋白表达的诱导因素 　　研究发现，正常情况下其表达甚微的细胞，如：巨噬细胞、SMC、T淋巴细胞、成纤维细胞等在一些诱导因素下可以大量表达OPN，包括：（１）高血压：Ｉizuka等[６]把人主动脉平滑肌细胞暴露在160 mmHg的高压下3h，然后再培养，结果3h后发现高压组同非高压组相比细胞增殖11％。免疫印迹分析发现，培养8 h以内OPN的表达没有明显的改变，24h后OPN表达比对照组增加大约50％；(2）高血糖：糖尿病人群中动脉粥样硬化的患病率较高，在糖尿病状态下，大鼠近端小管细胞中OPN表达上调[7]，另外，无论是人类还是大鼠，其动脉中膜平滑肌细胞的OPN表达均明显亢进。Takenoto等[8]对培养的大鼠主动脉平滑肌的研究表明，OPN在高浓度葡萄糖(25mmol/L）状态下，通过蛋白激酶C(PKC）活化，在转录水平上表达明显增加。高浓度葡萄糖处理的平滑肌细胞表达OPN增加可被PKC抑制剂GF109203X抑制；（3）低氧：对大鼠主动脉平滑肌细胞进行研究发现，在缺氧（3％Ｏ２） 2 h后OPN