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骨髓间质干细胞与心脏病的治疗 　　作者：郑敏 作者单位：咸宁学院药学院药理学教研室， 湖北 咸宁 437100 　　【关键词】 心血管疾病 　　心血管疾病导致的心功能障碍广泛分布并为成人发病率和死亡率增加的重要因素。一般认为，机体缺少心肌修复和再生的有效的内在机制，心肌细胞无增殖分化能力，受损后不能再生，只能由成纤维细胞填充，最终为瘢痕组织替代，并逐步发生心室重构形成慢性心力衰竭。传统的药物、介入治疗等虽然保护了心功能，患者生活质量亦提高，但并不能从根本上逆转心血管疾病引起的心肌细胞数量减少;心脏移植则由于供体来源少、风险大、排斥反应等难以广泛开展。干细胞移植有可能取代受损心肌细胞，增加有功能的心肌细胞数量，并建立新的血管来供应血运，为心肌梗死(MI)的治疗开辟了一条新途径。骨髓间质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell，BMSC)是存在于骨髓中的非造血干细胞，具有来源广、取材方便、免疫原性低、易于分离和体外培养扩增、易于外源基因的导入和表达、可进行基因修饰、能分化为心肌细胞和内皮细胞等优势，成为心血管疾病细胞移植治疗的理想种子细胞。 　　1 BMSC向心血管组织细胞分化 　　大量实验数据表明，BMSC一旦暴露于多种生理或非生理性刺激下，进一步分化的细胞显示心肌样细胞的几种特征。在这些条件下，体外分化的BMSC 显示出肌管样结构和时间依赖性同步跳动特性;电子显微镜分析揭示这些细胞具有心肌细胞样超微结构包括典型的肌小节，中心位核和心房颗粒;并呈现发育心肌细胞的几种功能特征包括肽类物质的产生、多重结构收缩性蛋白的表达;它们也显示出至少具有窦房结样和心室样细胞兴奋能力[1-3]。 　　已明确介质和直接的细胞与细胞之间的接触均可诱导BMSC分化为心肌细胞。通过与人类心肌细胞共培养，已经证实干细胞可以获得心肌细胞样的表型特征为表达重链肌球蛋白、Βactin及肌钙蛋白T。然而，当BMSC在心肌细胞条件培养基下培养时，仅能观察到Βactin 表达。因此，细胞与细胞之间的直接接触对于促使BMSC分化为心肌细胞基因谱系的心肌环境或微环境的信号传递是必须的。而且，人BMSC呈现出细胞与细胞之间的相互偶联并通过特殊的缝隙连接与心室肌细胞偶联[4，5]。实验观察到培养的心房和心室肌心肌细胞与从BMSC分化而来的心肌细胞样细胞具有惊人的细胞及分子相似性，为更好地理解原始成体细胞和BMSC源性心肌细胞之间的细胞对话迈出了重要的一步。已证实BMSC不仅可分化为心肌细胞，同时还可以分化为血管平滑肌细胞或其前提细胞(vSMC/PC)、祖细胞和内皮细胞。这些细胞类型均与血管系统发生有关，包括血管的生成和扩张。研究表明，新vSMC/PC形成出现在血管周围间质干细胞分化后，呈现血小板源性生长因子B(PDGFB)依赖性过程; 随后又发现, 在心肌内注射BMSC 后，组织病理学和免疫组织化学分析揭示注入的细胞分化为心肌细胞、vSMC/PC 和内皮细胞，同时可观察到血管密度的增加[6]。与此相似，给慢性缺血的狗心肌内注射BMSC可产生血管供应增加的效应并改善心功能。免疫荧光分析揭示，内皮细胞和平滑肌细胞出现共区域化，与肌细胞却不存在共区域[7]。因此，这些数据表明BMSC成为心梗后病人大量心血管组织细胞成分的一个理想的供体来源。BMSC分化为心肌细胞继发新生血管形成和心功能改善的机制与BMSC引起的生长因子的旁分泌有关[8-10]。已经证实，FGF2，一种主要的有丝分裂蛋白，是由BMSC产生，并分别刺激定型和未定型的BMSC持续休眠和增值[11]。未定型的BMSC代表休眠前体的少数细胞群，而定型和成熟的BMSC产生大量的终末分化的间质细胞系[12]。 　　以上阐述BMSC 具有分化为几种心脏表型细胞的潜能，多数情况是根据冰冻组织样本的免疫组织学分析显示固定细胞的细胞系的特殊细胞标志的共区域化的实验依据为基础。到目前为止，还没有证实BMSC 注入后在受体心脏检测到的已明确的免疫表型是肌原性和(或)血管细胞系分化的真正显示且不是假象。在骨髓干细胞可塑性研究方法学进一步发展后，相似的观点已引起广泛争议。因此，目前有必要借助一种合适的可确保实验结果准确、可重复及稳定的方法学检测进行BMSC分化为心肌细胞的研究。此将有助于避免不必要的争议诸如骨髓造血干细胞横向分化为心脏表型细胞继而影响心肌再生[13，14]。 　　2 临床前研究 　　啮齿动物如羊、狗、猪或猴梗死模型的实验研究表明，多种类型细胞进行心脏移植是可行的且有助于改善梗死心肌的收缩功能[15]。这些细胞类型包括自体同源的未纯化的骨髓、骨髓单核细胞、纯化的骨髓来源的细胞(CD34+ 和(或) CD113+)、心肌细胞、