深低温冷冻保存对脐血细胞的影响及机制.pdfVIP

中南大学学报（医学版） 2013, 38(7) ; J Cent South Univ (Med Sci) 709 DOI:10.3969/j.issn.1672-7347.2013.07.011 /xbwk/fileup/PDF/201307709.pdf 深低温冷冻保存对脐血细胞的影响及机制 李昕，陈方平，蒋铁斌，王二华，刘竞 ( 中南大学湘雅三医院血液科，长沙 410013) [ 摘要 ] 目的：判断深低温冷冻保存对于脐血单个核细胞和 CD34+ 细胞集落形成能力及凋亡率的影响，从而选 取能准确反映冷冻损伤的指标以及优化脐血冷冻保存的方式 。方法：从脐血中分离出单个核细胞及 CD34+ 细胞， 对这两种形式的细胞进行深低温冷冻保存，保存 30 d 后复温 ，并分别进行冷冻前后的粒 - 巨噬细胞集落形成单位 colony forming unit-granulocyte ，erythrocyte, (colony forming unit-granulocyte/monocyte ，CFU-GM) 和髓系多向造血干细胞 ( monocyte and megakaryocyte ，CFU-GEMM) 的培养，比较冷冻前后的细胞集落产率，同时Annexin V–FITC-PI 染色后流 式细胞仪检测两种保存形式的细胞冷冻前后的细胞凋亡率 。结果：冷冻保存对于以单个核细胞形式保存的细胞其集 落形成能力和以 CD34+ 细胞形式保存细胞的 CFU-GM 产率均无明显影响 (P=0.31) ，而对以 CD34+ 细胞形式保存的细 胞其 CFU-GEMM 的产率却有明显影响，冷冻后的 CFU-GEMM 的产率明显低于冷冻前 (P0.05) ，且冷冻前即发现两 种形式的细胞均有凋亡，冷冻后以单个核细胞形式保存的细胞其细胞凋亡率稍有所上升，但以 CD34+ 细胞形式保存 的细胞其细胞凋亡率更高。结论：冷冻前细胞即存在凋亡，冷冻对于以 CD34+ 细胞形式冷冻保存的细胞中的较早期 的祖细胞 CFU-GEMM 存在一定的损伤，其损伤可能主要为诱导细胞凋亡所致，而对于以单个核细胞形式保存的细胞 的影响较小。 [ 关键词 ] 冷冻保存；脐血；凋亡；髓系多向造血祖细胞 Effect of cryopreservation on umbilical blood cells and its mechanism LI Xin, CHEN Fangping, JIANG Tiebin, WANG Erhua, LIU Jing (Department of Hematology, Third X iangya Hospital, Central South University, Changsha 410013, China) ABSTRACT Objective: To evaluate the effect of cryopreservation on clonogenic ability and apoptosis rate of mono-nuclear cells and CD34+ cells in umbilical blood (UB), and to choose the index to present