人参不定根生物反应器培养及其动态学研究.pdfVIP

第 33卷 第 2期 Vo1．33NO．2 2O11年 6月 Jun．2011 人参不定根生物反应器培养及其动态学研究 李慧娟 ， 朴炫春 ， 代月 ， 金星爱。， 廉美兰 (1．延边大学长 白山生物功能因子省部共建教育部重点实验室；2．延边特产研究所：吉林 延吉 133000) 摘要 ：利用 5L气球型气升式生物反应器研究蔗糖和氧化锗浓度对不定根生长和人参皂苷合成的影响，结果 表明，当MS+IBA5mg／L培养基中加入蔗糖 50g／L时，每个反应器可收获不定根 34．5g(干重)，皂苷生产 量达到 61．1mg／L．显著好于蔗糖 3O和70g／L处理 ；培养基 中加入氧化锗 3O或 60 mol时，促进不定根鲜重 的增加 ．干重和增殖率在 60tLmol时最好 ；不定根生长 30d后将 60 mol的氧化锗加入培养基时．促进皂苷 的 合成 ，氧化锗处理 12d后皂苷含量 由5．66mg／gDW 增加到 1O．8mg／gDW．对反应器培养不定根生长、皂苷 合成及培养基变化动态进行研究结果 ，不定根生物量 (鲜重和干重)和皂苷生产量随着培养时间的延长而增 加 ，培养 30d时生物量达到最高值 ，但培养时期继续延长时生物量则不再增加 ，而皂苷生产量却在 4od时最 高。因此 ，为获得更多的皂苷 ，反应器不定根培养时期 以40d为最佳 。培养基 中糖浓度的变化与生物量的变 化呈负相关；pH在培养初期呈下降趋势 ，以后随培养时间逐渐上升 ，培养结束时接近培养初期值． 关键词 ：不定根 ；反应器；蔗糖 ；氧化锗 中图分类号 ：S567．5 1 文献标识码 ：A 文章编号 ：1004—7999(20l1)02一O09；一O5 人参 (Pa,ld．T．ginsengC．A．Meyer)是五加科人参属的多年生药用植物 ，其肉质根味甘、性平 ，有滋补强 壮 、益肺生津 、镇咳调经的作用 ；嫩茎叶有解毒、通乳的功能，并可作蔬菜食用H一．人参在 中国、日本和韩国等 国家已有悠久的栽培历史 ，播种是其繁殖 的主要方式，但从播种到收获需要 4--6年的时问，管理成本较高， 病害严重 ]，且因病虫害防治带来 的农药残留等问题成为阻碍生产的主要限制因子 ”一． 目前应用植物细胞培养技术成功地从许多植物中生产了有效物质 ~7一，包括人参 中的皂苷 ．然而， 培养的人参细胞 中皂苷含量不稳定 ，成为产业化的难题．通过发根农杆菌转化得到的毛状根培养也能生产人 参皂苷L】。 ，但毛状根诱导需要较高的生物技术 ，而皂苷提取物中还存在对哺乳动物有潜在危害的阿片样 物质Ⅱ ．人参不定根诱导方法较简单 ，是通过在培养基中加人生长素类物质从植物根系 中诱导愈伤组织后 进一步诱导不定根 ，所以不定根培养是解决人工栽培和细胞及毛状根培养所存在问题 的有效途径 ． 本文研究蔗糖和氧化锗对生物反应器中人参不定根生长及皂苷合成的影响，并对不定根培养的动态学 进行研究，旨在为今后工厂化生产提供理论依据． 1 材料与方法 将采 自长白山区5年生人参常规法消毒后 ，切成 1cm 的小块 ，接种在 MS_+I2，4一I)1．0mg／L-k蔗糖 30glL+琼脂 6．5g／L培养基中诱导愈伤组织 ，将诱导的愈伤组织接人 MS+IBA5mg／I÷蔗糖 30g／L÷ 琼脂 6．5g／L培养基中诱导不定根并增殖．将增殖的不定根 20g(Fw)，接种到含 4L培养基 (MSTIBA 5mg／L+蔗糖 30g／L)的气升式生物反应器 (5L气球型)中暗培养 ，培养温度 (25±2)℃，每 25d继代 1 次．将在反应器内培养 25d的不定根切成 lcrn大小 ，备用． 1．1 蔗糖浓度对不定根生长和皂苷合成的影响 为 了探明培养基中蔗糖浓度对不定根生长和皂苷合成的影响，在 MS—IBA5．0rag／[培养 中分别加入 蔗糖 3O，5O和 70g／L，pH值调节为 5．8．在 5L反应器中分别加入含不 同蔗糖浓度的培养基4L后 ，接种不 收稿 日期 ：2011—05—01 基金项