人参土壤中产β-葡萄糖苷酶菌株的分离鉴定.pdfVIP

第 33卷 第 2期 延 边 大 学 农 学 学 报 Vo1．33NO．2 20l1年 6月 JournalofAgriculturalScienceYanbianUniversity Jun．2O11 人参土壤中产 I3～葡萄糖苷酶菌株的分离鉴定 付玉， 金香梅， 尹成 日 (延边大学长 白山生物资源与功能分子教育部重点实验室，吉林 延吉 133002) 摘要 ：p一葡萄糖苷酶是在食品工业和医药工业 中广泛应用 的酶类 ，能够水解人参皂苷 中的糖苷键．从人参种 植土壤中分离纯化 203种微生物 ，从 中筛选 出的53种产 口一葡萄糖苷酶的菌株 ，主要属于鞘氨醇单胞菌属 (22．6 )、伯克霍尔 氏菌 (20．75％)、黄色单胞菌属 (15．1 )和链霉菌属 (15．1 )． 关键词 ：人参 ；微生物 ；土壤 中图分类号 ：$567．5 i 文献标识码 ：A 文章编号 ：1004—7999(2011)02—0127～06 人参为五加科人参属植物 ，为我 国传统中药之一．人参中的主要活性成分为人参稀有皂苷．目前制备人 参稀有皂苷的方法主要靠微生物转化法．用于制备稀有皂苷的微生物主要是肠道厌氧菌和土壤微生物．早期 人们利用人体排泄物中的肠道厌氧总菌群菌进行发酵_-1]，如 Hasegawa课题组 运用体外厌氧培养人肠 道菌群技术，对人参皂苷的肠道菌代谢过程进行系统的研究，并筛选 出单一肠道菌进行转化，如 Prevotella oris_l3]、 EubaceteriaA一44L5]及 Prevotellasp．S一1L6等 ；Bae等 采用肠道乳酸菌 Bifidobacteriummini— m KK—l和 B．choerinumKK一2共发酵转化二醇型皂苷 Rbl制备 CK，得到较好的转化效果，其单体转 化率可达 4l％，但厌氧菌转化的培养条件比较苛刻，培养基成本高．土壤微生物降解人参皂苷的能力较低 ， 目前这方面的研究还处于起步阶段 ，国内外研究报道很少．因此 ，寻求一个具有高活性的微生物很重要．本研 究从人参土壤中分离微生物 ，通过七叶苷显色技术 ，筛选出具有活性的微生物，并确定其归属，为微生物转化 人参皂苷提供基础． 1 材料与方法 1．1 试剂 七叶苷购 自Sigema公司，氯化钠 、硫酸铁 、琼脂 、酵母粉等购 自韩 国Coretech公司；人参土壤采 自中国 吉林省长 白山区人参种植地． 1．2 仪器 恒温空气浴振荡器 (韩 国Coretech公司)，DNA 试剂盒 (韩 国Coretech公司)，薄层层析板 Silicagel60 一 F254(德 国Merck公司)，PCR纯化试剂盒 (韩国Bioneer)． 1．3 微生物的分离和筛选 1)十倍稀释法 将盛有 1．0g土样和 9mL灭菌水的三角瓶放在振荡器上振荡 10min，使土样均匀地 分散在稀释液中成为土壤悬液．吸取0．1mL土悬液到0．9mL无菌水 中，依次按 1O倍法稀释，稀释到1O_。。． 2)平板涂布法 把 0．2mL稀释液分别均匀涂在各种培养基上 ，放入 3O℃恒温培养箱 中培养 ，观察各 培养基上菌落的生长情况． 3)将灭菌的接种环伸入培养基内，取出少量单一菌株放入待接种培养基 ，自低端 以直线或曲线划线后 放人生化培养箱中培养． 4)利用革兰氏染色法观察菌株大小、形状及其细胞结构 ，并进行分类编号．命名好 的菌株加入 2O％ (v／v)glycerolstocksolution，放置于一7O℃ 低温冰箱里保藏． 收稿 日期：2011--04～25 基金项 目：国家 自然科学基金 ． 作者简介：付玉 (1983一)，女，辽宁鞍山人，延边大学理学院化学系，在读博士．尹成 日为通信作者， Tel：O433—2733405，E—mail：cryin@ybu．edu．cn l28 延 边 大 学 农 学 学 报 第 33卷 1．4 筛选产 p一葡萄糖苷酶的菌株 七叶苷 (Esculin)为白色针状结晶，熔点为 2O4～206oC，味苦，无气味