COX-2蛋白及其基因在乳腺癌中的表达及临床意义.pdfVIP

密切相关，可作为判断乳腺癌预后、转移的生物学标志物。 【关键词】乳腺肿瘤；COX．2；原位杂交；免疫组织化学染色。 乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，已成为女性首发的恶性肿瘤，而且其发病率仍在逐年升高，占 预后的评价以及对术后化疗和内分泌治疗效果的预测和判断，对提高乳腺癌的疗效及患者的生活质量有着 催化花生四烯酸(arachidonic 个能够通过促进肿瘤新生血管形成和肿瘤细胞增殖，从而影响乳腺癌预后的指标。COX一2在结直肠癌【4】、 胃癌f5】、胰腺癌16]、非小细胞肺癌‘71、头颈部肿瘤【8】、膀胱癌例及恶性黑色素瘤‘1们等多种肿瘤中表达异常， 且与浸润转移和患者的预后性密切相关[11-1210我们应用S．P免疫组化染色技术和原位杂交技术观察了COx．2 蛋白其基因在乳腺单纯性增生、乳腺导管内癌和乳腺浸润性导管癌组织中的变化及其与年龄、肿瘤大小、 组织学分级与淋巴转移等临床病理特征之间的关系，现报告如下。 l材料和方法 1．1肿瘤标本及资料来源收集经临床病理医生诊断为乳腺单纯增生、乳腺导管内癌组织标本各30例，乳 激素治疗及放疗。组织标本经福尔马林常规固定，石蜡包埋，连续切片4um，裱于经APES处理的载玻片上， 65℃烤箱烤片过夜，防止脱片。病理分型和组织分级按WHO分类标准，分期按TNM标准。 TGAGTGTGGGA：兀TGACCAG TrGTG 靶基因的mRNA序列为：5’．ATGTA TATAA．3’；5’一GAACG TCTGC AATAACATICCCTTCCTrCG-3’：5-TGCCTCAATTCAGTCTCTCA AATAA．3’。格兰氏 微波输出为功率900W，分为微波、光波、光波／微波组合I和光波／微波组合II四种输出功能。微波输出功 率分为5档调节，光波输出为单一光波管发光，光波臌波组合I为30％的时间微波输出，70％的时间光波 输出，光波效果最佳；光泐微波组合Ⅱ为55％的时间微波输出，45％的时间光波输出，微波效果最佳。电 热恒温水温箱：上海新苗医疗器械制造有限公司生产，型号H．5WX-42085；电热恒温培养箱：上海新苗医 疗器械制造有限公司生产，型号DNp-9052BS．Ⅲ；自制金属玻片架。 做抗原修复处理【l孓14】。免疫组织化学染色采用MW-SP免疫组织化学染色方法，进行COX．2标记，对照染色： 每次用已知COX-2阳性标本切片作为阳性对照：用PBS代替一抗或生物素标记的桥抗(二抗)作为阴性对 照。COX-2阳性反应物为浅棕色至深棕色颗粒，分布在癌细胞胞浆及胞膜。 1．4核酸分子原位杂交探针为寡核苷酸探针，经地高辛标记，根据探针与相应的靶基因结合的原理进行 免疫原位杂交，原位杂交步骤严格按试剂盒说明书进行，并以原位杂交用PBS代替探针作阴性对照，光学 显微镜观察着色反应。 1．5结果判定COX．2阳性细胞为淡黄一棕黄色颗粒，染色均定位于细胞胞浆，少数位于胞膜。每例切片 选择10个高倍视野，按阳性细胞数占视野中总细胞数的百分比分为阳性与阴性，无阳性着色或阳性细胞数 名病理医生以盲审法确定。 1．6统计学分析数据采用SPSS 17．0统计分析软件处理，运用矿检验，以P0．05作为差异有统计学意义。 2结果 2．1 COX．2蛋白与COX．2mRNA在不同乳腺组织中的表达情况 免疫组化和原位杂交标记COX-2阳性反应物为棕黄色颗粒，主要分布在癌组织的细胞胞浆和胞膜。COX-2 蛋白免疫组化染色在乳腺单纯性增生、导管内癌和乳腺浸润性导管癌的阳性表达率为分别是10％、56．7％和 表1 COX-2蛋白与COX-2mRNA在不同乳腺组织中的表达 x圉瑚帕相钿 抽l黼 至Q茎：兰里皂 曼Q圣2型垒 不同乳腺组织 + 阳性率(％) ，P -1- 阳性率(％) ，P ●-_________-___-___-●__-__-________●_____■-●-___●●--●-●-■。____-____________--__●_____●____-____--___-______-·__●_____