FISH技术检测宫颈脱落细胞hTERC基因扩增的临床意义.pdfVIP

1．2方法 1．2 细胞置37℃水浴箱中40rain，缓慢加2ml固定液(甲醇：冰乙醇=3 1)于试管中，混匀，1000中m离心 1～2111l液体重新吹打滴片，56C环境中老化玻片30min或室温下过夜老化。 储存液加入到干燥预热至370的另一个考普林瓶中．宣温下依次在2xSSC(PH70)溶液中漂冼玻片2次 每次5min、0 100％乙醇中室温浸泡10rain自然干燥玻片．加热玻片至56(2。 交区域．加上盖玻片，用橡皮腔封边：将玻片放于Pc厘撞杂交仪中75℃高温变性5min，45℃杂交过夜。 片．暗处放置10—20min；荧光显微镜下观察。 1．3 染后蓝色发光，边缘清楚，形态呈不规则圆形。蓝色瞎光片组可以观察到绿色荧光信号，利用绿色滤光片 可卧观察到红色荧光信号。选择背景干净、杂变信号强、轮廓清楚、无重叠的细胞．随机计数100个细胞 内的杂交信号。利用Video-Test提供的FISH分析软件进行图像分析。 1．4绪果判断t20个正常人的HSH检测标本每个随机计数200个细胞，统计出现2个以上红色信号细胞 数目的百分比计算闽值。闻值=平均数(M)+3x标准差(sD)。太于阐值者判断为阳性。 有统训学意义。 2结果 hTERC基因正常表选与异常扩增的荧光信号见囤l和图2。 目I 目2 2 5扩增 hTERC基因2：2t常达 hTERC基W “色信{代hTERC*目∞拷Ⅲ数镕色信号代表3目染色体若g粒的拷m数 21 100例患者细胞学诊断和组织学诊断的对照：见表 表l 组织学与细胞学诊断对照 2．2 100例患者按照组织学诊断可分为：见表2。 表2 组织学分类与基因扩增阳性率 2．3 100例患者按照细胞学诊断可分为：见表3。 表3 细胞学分类与基因扩增的阳性率 2．4 hTERC基因扩增荧光信号显示：红：绿信号=2：5及以上算做hTERC基因高拷贝型。见表4 表4 组织学分类与基因高拷贝型 3讨论 后，在荧光显微镜下检测荧光信号而得出结果。目前已经广泛应用于产前诊断、血液肿瘤、膀胱癌、 乳腺癌、肺癌以及胰腺胆道肿瘤等。技术操作相对简单，重复性好、稳定，并具有有效地灵敏性和特 异性。 3．2 hTERC基因与CIN和宫颈癌目前的研究已经初步提示hTERC基因扩增在宫颈癌的发生发展中起 与试验的条件及制片方法有关，李静然，魏慧丽等人报道采用TCT低渗法制片杂交成功率高背景清晰。14】 另外，荧光信号显示高拷贝型基因在CINH及以上的病变中明显高于CINI及以下的病变。这可能与病变 的基因异常改变是宫颈癌前病变发展到浸润性宫颈癌所必需的条件【5】。由于本研究未能进行随访所以未得 到结论。 33hTERC与细胞学检查和I-IPV检测近年来宫颈脱落细胞的筛查使宫颈癌的发病率有所降低，但敏 性高但特异性不稳定，这与HPV感染可以自然转阴有关，对HPV感染史的患者进行此基因扩增的检测可 为浸润癌的过程密切有判61。综上所述，TERC基因异常扩增的检测不仅有助于CIN及宫颈癌的诊断同时 对预测其预后也有重要的临床意义。 4展望 大量研究已经表明TERC基因与端粒酶的活性有关，随着研究的深入如果能研究出一种抗 hTERC抑制端粒酶的活性，有可能导致肿瘤细胞的凋亡，可开辟治疗宫颈癌的一条新途径。 参考文献 l Arkin J．et theworldcancerburdenGobacan2000J，Int DM，Bralaya1．Estimzting 2 3 李町希等，hTERC基因与妇科肿瘤相关性研究进展J，山东医药，2009，49(15)115 4 5 ofCervicalCancer(J)AmJ Development pathol，2005，166：1229-1238 6 余兰等，hTERC基因异常扩增在宫颈病变中的临床意义J，中国优生与遗传杂志，2009，17(4)28—29 FISH技术检测宫颈脱落细