阿司匹林和低剂量已烯雌酚合用对去卵巢大鼠骨质疏松的预防作用.pdfVIP

广东省药理学会抗炎免疫专业委员会第一届学术报告会论文集 东莞 2011年10月 ………………li………Ii…el……el………………in……●●IniD…………………………………imi………………-● 骨质疏松是一种以骨量减少、骨强度降低和微结构损伤等为特征的系统性骨代谢性疾病 ‘¨。骨质疏松症是一种发病率很高的世界性医学难题，大部分绝经后妇女可患此病‘刭，补充 雌激素的替代疗法曾是预防绝经后妇女骨质疏松的主要手段，但长期应用发现该疗法不仅显 著增加乳腺癌的发生风险，还能显著增加血栓栓塞性疾病和心血管事件的风险∞·引。阿司匹 林是常用的非甾体类解热镇痛抗炎药，其抗血栓形成及预防心血管意外的作用已经被证实 嘲，本项目组近年的研究已证实阿司匹林还有预防骨质疏松的作用‘引。该实验据此设计了小 剂量阿司匹林和小剂量已烯雌酚组成复方制剂(简称A-DIO合剂)，希望通过添加阿司匹林 以减少雌激素的用量，在增加抗骨质疏松的同时，也能减少雌激素导致的血栓形成和心血管 意外等风险。本实验以大鼠去卵巢建立骨质疏松模型，通过血液生化、骨形态计量学、骨密 度等研究方法，观察该复方制剂是否可对去卵巢大鼠骨质疏松有增效作用并减少雌激素的不 良反应。 1材料和方法 1．1材料 1．1．1实验动物及分组 g。适应性喂养lOd。于实验开始前随机挑选出6只作为基础组(BAS)，于实验前进行取材。 量已烯雌酚阿司匹林复方组(OVX+A～DIO)，每组9只。所有动物自由摄水及摄食(标准饲料， 含钙I．33％，磷0．95％)，在室温25’28C，湿度75’8096，清洁级环境中喂养。 1．1．2药物 已烯雌酚片，合肥久联制药有限公司，每片0．5mg；低剂量己烯雌酚阿司匹林复方制剂 (A-DIO合剂)：每片含阿司匹林lOOmg，已烯雌酚0．1mg。(由广东医学院医药科技开发中 Chemical ChemicalCo。 心配制)；盐酸四环素，美国Sigma Co；Calcein，美国Sigma 1．1．3仪器 美国BuehlerLTD慢速锯；德国Leica2155硬组织切片机；德国Leica碳化钨钢刀； 日本Nikon自动化图像数字分析仪；美国OsteoMetrics骨组织形态计量学软件；美国 Sabrescanner。 Norland公司p-DEXA 1．2方法 1．2．1动物处理 广东省药理学会抗炎免疫专业委员会第一届学术报告会论文集 东莞 2011年10月 动物在全身麻醉条件下，参照文献方法口1对各实验组大鼠作双侧去卵巢手术，假手术组 (BAS组)做同样手术，但不去除卵巢。术后三天开始随机分组，每组9只。正式实验：假 组)以已烯雌酚30岭·kgq．d‘1灌胃，低剂量已烯雌酚阿司匹林复方组(A—DIO合剂组)按已 重一次，按照体重变化调整给药剂量。所有动物在处死前14、13天和4、3天分别皮下注射 四环素30mg·kg-1．和钙黄绿素10lng·kg-1·进行体内荧光标记。实验结束时，麻醉后心脏抽血 处死大鼠，取血液做生化指标测定，并取左侧胫骨做骨组织形态计量学研究，取左侧股骨做 骨密度扫描。 1．2．2血液生化检测 血液生化指标含总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇 (LDL_c)和碱性磷酸酶(ALP)，以上指标均通过试剂盒进行检测，试剂盒均购自南京建成 生物工程研究所。上述所有操作均按照试剂盒说明书要求进行。 1．2．3骨组织形态计量学测定 取左侧胫骨，以慢速锯暴露骨髓腔，取其上段以10％福尔马林缓冲液固定24h、随后进 行梯度酒精脱水，二甲苯透明后以甲基丙烯酸甲酯进行不脱钙骨包埋。包埋剂硬化后以石膏 打磨机打磨成合适的形状，随后用Leica2155型硬组织切片机切成9归厚片和5岬薄片。 9pm厚片直接封片测量动态参数；5岬薄片行硝酸银染色，封片后测量静态参数，运用公式 ‘8，91计算有关参数。 为避开初级海绵体，胫骨上段测量范围为生长板远端lmm4mm之间的松质骨区域。静态 测量参数包括骨组织总面积(T．Ar)、骨小梁面积(Tb．Ar)、骨小梁周长(Tb．Pm)、破骨细 胞个数(N．Oe)、破骨细胞贴壁长度(Oc．S)。动态测量参数包括单荧光周长(sL．Pm)、双荧 光周长(乩．Pm)、双标记间隙(Ir．L．Wi)。参照相关公式，可以