白果内酯抑制水通道蛋白-9的表达减轻脑水肿的作用机制.pdfVIP

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2015-08-29 发布于安徽
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白果内酯抑制水通道蛋白-9的表达减轻脑水肿的作用机制.pdf

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1．2预治疗预治疗组t：手术前腹腔注射白果内酯，先用～：甲基亚砜(DMSO)溶解后，溶于生理盐水，水0．5ml腹腔注射。缝合伤口，单笼饲养观察。造模成功的标志为左侧征，即大鼠清醒后提尾悬挂时右侧前肢内收屈曲，爬行时向右侧转圈，严重时右侧倾倒，无神经功能缺损的不计入实验。预治疗组于造模前lh注射白果内酯 (10mg／kg，i．p．)，栓塞对照组于造模前lh注射0．5ml生理盐水(1％DMSO)。整取出大脑分为左右两侧，用生理盐水冲去血迹，用滤纸略吸后称取湿重，然后在105℃烤箱内烘烤过夜，称取干重，计算含水量=【(湿重．干重)，湿重]x10016l。然后置于4％多聚甲醛(pH7．2)中固定，用数码相机照相后，用PhotoShop进行梗塞面积测量。 1．6 HE染色及免疫组织化学染色将取出的大鼠脑组织于10％中性福尔马林液中室温固定12h后，常规 Cruz 脱水、包埋、切片及HE染色。用小鼠抗大鼠AQP-9多聚抗体(Santa Cruz，CA) Biotechnology，Santa 进行免疫组织化学染色，二抗及显色体系购于北京中衫金桥生物技术有限公司。 1．7 Real．time mRNA含量变化将所取脑组织迅速分为左右两半，用RNA RT．RCR定量测定AQl9 Green 杭州Bioer荧光定量PCR仪，SYBRI参入法进行Real．time RT-RCR定量测定，引物序列为AQP9， (GenBankTMaccessionnumber．NM022960)，5-GATGCC订CTGAGAAGGA GAGCCATCACGACTG accession C．3’(reverse)；GAPDH(GenBankTM TGCAGTGCCA(迁CTCGTC．3’(forward)，5’．GCCCTTGAA(m’GCC ANOVA)及非配对双尾t检 1．8统计学分析数据采用均数±标准差(I±sd)，进行方差分析(one．way 验，以P0．05为差异具有统计学意义。 2结果 2．1含水量测定 ■Infarction 口contralater81 88。6 f宰／ 82 80 78 76 74卜 72r 70。‘‘。—— normal vehtcle bilobaltde 1 Effectofbilobalideonbrainwatercontents intherats． induced Figure bypMACO 167 8l!040 如图I所示一pMCA024h扁-大鼠两侧脯组织古，K最明显高r正常自l(75 拴塞侧(8173+047)较对侧(79 53+_0 70+0 塞侧(80 36)还足对侧(78 2．2栓塞面积测定