广地龙中五种游离氨基酸含量测定及氨基酸类成分指纹图谱的研究.pdfVIP

广地龙中五种游离氨基酸含量测定及其氨基酸类成分指纹图谱研究 广东广朴l510006) 摘要：目的建立广地龙中游离氨基酸类成分的HPLC指纹图谱分析方法，并测定主要五种氨基酸含量，综合评价药材质量． x mm4．6mm，5 A 方法采用2．4一二硝基氟笨柱前衍生化HPLC法．色谱柱：KromasilC．18分析柱(250 um)；流动相： mol·Lo醋酸钠(1：100，乙酸调Ph 为乙腈、B为N，N．二甲基甲酰胺一0．025 6．0)，采用梯度洗脱；检测波长：360nm；柱 有峰，不同批次药材相似度均大于0．92．结论建立的指纹图谱和含量测定方法可作为广地龙的质量检测标准，为广地龙药材 的鉴别和质量评估提供依据。 关键词：广地龙；指纹图谱；氨基酸；HPLC 地龙学名蚯蚓，为钜蚓科动物参环毛蚓、通俗 司)，2，仁二硝基氟苯为生化试剂(批号：FIM01， 环毛蚓、威廉环毛蚓或栉盲环毛蚓的干燥体，性寒、 东京化成工业株式会社)，水为超纯水，其它试剂 味成，是我国常用的重要中药材之一。中国药典收 均为分析纯。 载的主流药用品种为钜蚓科动物参环毛蚓，习称 1．3对照品 “广地龙”，主要分布在广东、广西、福建等地…。 有清热定惊，通络，平喘，利尿的功能，用于高热 购于中国药品生物制品检定所。 神昏，惊痫抽搐，关节痹痛，肢体麻木，半身不遂， 1．4药材 肺热喘咳，尿少水肿，高血压症【2】。近年来广地龙 试验中所用广地龙药材均由广东省博罗先锋 在中医临床及中成药生产上得到越来越广泛应用， 药业集团有限公司提供，经鉴定均为钜蚓科动物参 以其为原料药的中成药有地龙注射液和止喘灵注 环毛蚓。见表1。 射液等40多个品种。 表I广地龙药材与批号 地龙质量标准收载在《中国药典))2005年版(一 部)，但无含量测定。据报道，地龙含有17种氨基 酸，且数量不少【31。另见文献报道对地龙药材o．9％ 生理盐水提取液中小分子成分次黄嘌呤、次黄嘌 呤、尿嘧啶进行测定并建立指纹图谱【4】，但未见其 所含的氨基酸类成分的HPLC指纹图谱分析报道。 本试验研究并建立广地龙中游离氨基酸的HPLC指 纹图谱，并对主要的五种氨基酸进行含量测定，为广 地龙的鉴别和质量控制建立有效的检测方法和依 据。 1仪器与材料 2结果 1．1仪器 2．1色谱条件 色谱柱为Kromasil ram×4．6mm，5 1200系列高效液相色谱仪(美国安捷 C18(250 Agilent 伦科技公司，包括四元梯度泵、真空脱气机、自动 lam)；流动相A为乙腈，B为N，N-二甲基甲酰胺 --0．025 mol·L．’醋酸钠(1：100，乙酸调pH6．0)； 进样器、柱温箱、DAD检测器、Chemstation工作 站)；水浴恒温振荡器(江苏省金坛市金城国胜实 验仪器厂)。相似度软件为“中药色谱指纹图谱相似 】0％；B：90％～57％～90％)；检测波长为360am； 度评价系统”(中国药典委员会2004版)。 流速为1．0mL·min～：柱温为40℃；进样量为10laL。 1．2试剂 理论塔板数按缬氨酸计算应不低于5000。 乙腈为色谱纯(天津市四友精细化学品有限公 2．2供试品溶液的制备