NEWS——血清中内源性磷酸化多肽的高选择性富集和生物质量谱分析.pdfVIP

NEWS 第37卷 分析化学(FENXIHUAXUE) 第3期 Chinese of Journal 2009年3月 AnalyticalChemistry I 肽组(peptidome)是指蛋白质组巾的低分子量组分(MW10kDa)，这部分低分子量的多肽以前被认为是毫无价值 多的生物垃圾。近年来，随着多肽组学研究的逐步深入，发现多肽组中蕴含着丰富的生物信息，多肽组的表达模式与 临床病症密切相关，为疾病标记物的发现提供了新的视角。血清是多肽组学研究最为广泛的样品，多肽分子从各种细胞 和组织微环境(如肿瘤组织)中分泌出来，继而被带人体液进入循环系统，因此血液中几乎包含了所有人类组织、器官和 体液巾的多肽组分。作为蛋白质翻译后修饰最为广泛的一种形式，磷酸化修饰参与调节细胞的多种生命活动过程，包括 细胞的增殖、发育和分化、细胞骨架调控、细胞凋亡、神经活动、肌肉收缩、新陈代谢、肿瘤发生与发展等。通过分析磷酸 化修饰蛋白在不同病理状态下相对量的变化，可迸一步发掘与疾病产生相关的重要生物标志物，为揭示其分子机理奠定 基础。至今，有关磷酸化修饰的内源性肽段的研究很少报道，其中一个主要的原冈是体液(如血清)巾蛋白质组复杂的 组成和极高的动态范围，对内源性磷酸化多肽的富集造成了很大的干扰。 中国科学院大连化学物理研究所分离分析化学重点实验室、国家色谱研究分析中心邹汉法研究员领导的生物分离 分析新材料与新技术课题组(1809组)报道了一种基于有序介孔材料的周定化钛离子亲和色谱(Ti“一IMAC)固定相对血 清中内源性磷酸化多肽进行富集的方法(Anal．Chem．，ArticleASAP；Publication ac801974f)。该材料具有高度有序的微孑L结构而可将大分子量的蛋白有效排除在孔外，而孑L内的固定化金属钛离子对 磷酸化多肽具有良好特异性亲和作用，因此达到血清中内源性磷酸化多肽高选择性富集的目的。实验结果表明，标准 口．酪蛋白酶解液和血清巾内源性磷酸化多肽经基于有序介孔材料的Ti“·IMAC固定相富集后的MALDI质谱检测灵敏 用于肝癌患者和健康人(各12例)血清中内源性磷酸化多肽表达的差异分析，发现二组人群的内源性磷酸化多肽的表达 存在显著差异，同时采用iTRAQ同位索标记技术进一步验证了MALDI质谱检测结果的准确性。所建立的方法可以广泛 应用于其它生物样品中磷酸化多肽的差异分析，为疾病发生机制的阐明和标记物的发现提供r新的手段。 ／ON oH oH a NH， NI —Si一--Si一 一Si一一Si— 12 盘匦±卜马苣匦盘产坐业型．业◆曲盘妇 T一+ Ti4+ 6001600{ r‘J3 二 1 …l i焉4fKIUeo‘{!々自目{』自bkbt‘‘；；育 lncubatedwith SelectiveenrichmentWaste MAI。DI．TOF Ti“．MC‘M．41 图l (a)崮定化钛离子亲和色谱(Ti“．1MAC)材料的合成路线；(b)内源性磷酸化多肽选 择性富集和质谱榆测的流程图。 图