PRV LA株gD基因的序列测定及其重复高变区的发现.pdfVIP

2003V01．23No．4 第23卷第4期c*而L，y“＆iJuly 350 中国兽医学报2003年7月 PRV LA株gD基因的序列测定及其重复高变区的发现 范伟兴…，魏 荣2，张雪莲2，陈溥言2．赵宏坤” (1．山东农业大学动物科技学院，山东泰安27lol8 2．南京农业大学动物医学院，南京2l0095) 453 摘要：对猪伪狂犬病病毒鲁A株(PRVLA株)gD基因进行了克隆和序列测定，结果表明：在测序的1bp的DNA 203 序列中包括着1个l LA株与PRV 98．o％、98．1％、98．6％，氨基酸的同源性分别为97．8％、97．8％、97．5％、98．1％、98．6％；发现PRvLA株gD基因与 Ea株、Hubei株、Rice株、NlA一3株、Kaplan株的gD基因均在802～837 对应的是gD267～279位氯基酸残基Arg—Pro的重复高变区。正是该重复高变区的碱基缺失或插入使得PRVgD的 1 94～1 ()RF在1 21Snt阎变化，gD前体的氧基酸致基为398～404个。 关键词：伪狂犬病毒LA株{gD；核苷酸序列；氨基酸序列；gD基因重复高变区 中圈分类号：Q78；S852．65文献标识码：A 文章编号：l005—4545(2003)04～0350—03 1．3 伪狂犬病病毒(pseudorablesvirus，PRV)又称猪疱疹病工具酶 TaqDNA聚合酶、T。DNA连接酶和蛋白酶 毒I型，是家畜和野生动物伪狂犬病的病原体，该病毒对猪的 K，均为大连TaKaRa公司产品。 危害性最大Ⅲ。PRV的基因组是双殷线性DNA，约150kb， 1．4 PRVLA株病毒DNA的提取将出现80％CPE的 病毒基因组是由长独特区(UL)、短独特区(US)以及US两RK细胞单层用o．olmol／L 000 侧的末端重复序列(TR)和内部重复序列(IR)所组成。在us灭菌橡皮铲刮下细胞，2 r／min离心5m-n，收集细胞，每 loo 区现已被定位的基因有7种：糖蛋白gD、gE、gG、91基因、蛋mL中方瓶培养的细胞加1．5mL裂解液(含o．2g／L蛋 NaCl，lommol／LTris—HcI 白激酶(PK)基因、llooo和28ooo蛋白基因，其中gD基因是白酶K，l蹦sDS，100mmol／L mmol／LEDTA)，37 h，将裂解物用酚 PRV的必需基因。gD为病毒的主要中和抗原，并能识别细胞(pH8．o)1 C水浴3～4 表面脊髓灰质炎病毒受体家族的受体，介导病毒与靶细胞的 m01／L ／氯仿各抽提1次，加2倍体积无水乙醇，1／lO体积3 3 稳定结合，参与病毒感染的吸附和穿入过程，但gD是病毒复 NaAc，置一20Cmin，12 min沉淀DNA． OOO×g离心lo 制和细胞融合所非必需的。2]。因此，gD基因是伪狂犬病毒诬 单位疫苗的主要候选基因，也是缺失致弱疫