28例黏多糖贮积症Ⅳ型的基因突变的分析.pdfVIP

2011年第ll届中华医学会儿科学分会内分泌遗传代谢学组学术会议 资料汇编 157．原代大鼠肝细胞分离及培养鉴定 华中科技大学同济医学院附属同济医院儿科(武汉，430030) 叶娟王群付溪郑瑞丹应艳琴罗小平 目的探讨一种原代大鼠肝细胞分离及培养的简易方法，并对其生物活性及 纯度进行鉴定。 方法 采用改良原位两步灌流法及多次过滤低速离心法分离原代大鼠肝细 胞，用含体积分数10％优质胎牛血清DMEM高糖培养基培养，台盼蓝拒染法检测 接种时肝细胞的存活率，倒置显微镜动态观察肝细胞形态变化。MTT法检测肝细 胞生长活性。过碘酸-schiff反应检测肝细胞糖原合成能力并利用免疫细胞化学 方法检测肝细胞角蛋白18的表达来联合判断肝细胞纯度。 结果每只老鼠可以获取1．38．108～1．74．108个肝细胞，接种瞬时肝细胞活 性大于90％。倒置显微镜下观察肝细胞在接种后4小时基本完成贴壁，贴壁的细 胞胞体变大变平，随后细胞相互靠拢成岛状或条索状连接。MTT法检测发现肝细 胞在培养48小时活力最高。过碘酸-schiff糖原染色发现肝细胞内糖原被染成 红色颗粒或者片状。抗大鼠细胞角蛋白18特异性抗体免疫细胞化学鉴定发现阳