组织工程真皮修复糖尿病裸鼠皮肤缺损的实验与研究.pdfVIP

中华医学会显微外科学分会2011年 显微外科学分会学术年会 bmnch ◎ Mic麟opicsurgery 组织工程■皮修复糖尿瘸裸■皮肤缺摄的实验研究 麻醉。对糖尿病裸鼠背部皮肤进行消毒，用剪刀在背 黄昕崔磊吴守成沈向前曹谊林 部皮肤制造全层皮肤缺损，直径为18mm。18只糖尿病 裸鼠被分成3组：真皮替代物治疗组、单纯PGA治疗组 随着生活水平提高，生活模式改变及社会老龄 和空白对照组。创面上面覆盖Tegaderm无菌敷料。 化，糖尿病发病率逐年增高。糖尿病皮肤溃疡为糖尿 病常见并发症之一，多与糖尿病病程、病情关系密 1．6创面愈合比例观察 切。目前对于糖尿病皮肤溃疡，临床上常规治疗为控 对实验动物进行观察，在第2周和第4周时对创面进行 制感染、血管重建、减压治疗和清创术。但常规的治 拍照，以计算创面愈合比例。同时于第4周对各组分 疗并不能取得令人满意的治疗效果。近年来随着组织 别处死动物，对创面进行取材，固定在4％多聚甲 工程学的建立和发展，并且在临床各个领域成功应 醛，脱水，包埋在石蜡中，切片5um厚度，准备做组 用，使糖尿病皮肤溃疡的治疗方法有了更多新的选 织学和免疫学研究。 择。因此，我们探讨以d,JL包皮真皮成纤维细胞为种 G H．E染色和真皮层厚度评价 子细胞，P A为支架材料，应用组织工程方法构建组 织工程真皮。我们通过对裸鼠腹腔注射STZ，诱导糖 对组织切片进行H．E染色，在显微镜下对进行观察及 Plus6．0图像分 尿病裸鼠模型形成。进而应用培养的真皮替代物进行 拍照。通过双盲法，使用Image-Pro 修复糖尿病裸鼠皮肤缺损，进行检测裸鼠创面愈合 析软件对第4周的真皮替代物组、单纯PGA组、空白对 率，HE．染色切片进行观察再生真皮层程度，苦味酸 照组的H．E．染色下组织切片不同部位进行测量，计 染色观察再生胶原情况。以研究我们构建的真皮替代 算，求得第4周各组真皮层厚度。 物是否具有修复糖尿病皮肤创面缺损的实验研究。 材料与方法 1．8苦味酸天狼猩红染色和分析 1．1实验材料雄性裸鼠30只，6周，由中科院上海 对石蜡切片进行苦味酸天狼猩红染色。用双盲法观察 高倍视野下，组织切片胶原纤维的厚度和结构。胶原 实验动物中心提供，体重19’229。STZ(美国Sigma公 PlUS 司)，便携式血糖测量仪及试纸(强生公司)。 含量通过Image-Pro6．0图像分析软件进行计 1．2糖尿病裸鼠模型的制备将裸鼠禁食l6小时 算。相对胶原含量通过计算在红色强度峰值(值为 255)的像素下，超过设定阈值为128的总共像素的数 后，STZ溶于柠檬酸一柠檬酸三钠缓冲液(0．1m01， llm滤器过滤除 值。对各组的相对胶原含量通过与空白对照组作为基 pH4．5)配制成1％的注射液，经0．22 菌，以1 线组进行计算最终比率值。 50mg／Kg的剂量腹腔注射，给药后两小时进 食，不禁水。分别于注射后第3天及一周通过断尾采 统计学分析 血测定血糖值。以注射后一周检测血糖值≥ 实验数据用studentt检验和方差分析(ANOVA)。 16．7mmol／L为成模。 结果 1．3