作为细胞微载体的明胶基缓释微球的制备.pdfVIP

Vol_28 高等学校化学学报 No．9 2007年9月 CHEMIcALJOURNALOFCHINESEUNIVERsr兀ES 1776—1780 作为细胞微载体的明胶基缓释微球的制备 王忆娟1，刘守信1，房喻1，黄沙2，金岩2，姜宇1 I．应用表面与胶体化学教育部重点实验室．陕西师范大学化学与材料科学学院，西安710062 2．第四军医大学口腔医学院组织工程中心，西安710032 摘要用改良的乳化冷凝法制备载牛血清蛋白 BSA 的大粒径明胶微球．结果表明。明胶水溶液的质量分 数为25％、水相与油相体积比3：20、搅拌速度300r／rain、交联剂用0．1mL质量分数为25％的戊二醛、表面 活性剂用0．1gspan一80为制备平均直径约250“m明胶微球的理想条件．所制备微球的后处理方法不同，则 明胶微球的表面形貌也不同，细胞牯附率不同．空白明胶微球在体外可以完全降解，载BSA的明胶微球对 BSA具有良好的缓释性，释放时间可长达30d．显微镜观察成纤维细胞在明胶微载体上生长良好． 关键词明腔微球；成纤维细胞；缓释；微载体 中图分类号0631；0636文献标识码A 文章编号02514 790 2007 09—17764 5 组织工程的核心是构建与细胞支架相结合的复合体，其中由细胞和生物材料所构成的细胞支架是 组织工程的三大要素之～．细胞支架的功能是为细胞的增殖提供三维空间和新陈代谢的环境，并决定 新生组织、器官的形状和大小”J．明胶是一种来源丰富的天然高分子材料．研究结果表明，明胶微球 具有良好的缓控释放生长因子的功能，克服了生长因子易变性失活的缺点，能更好地保证细胞的生长 繁殖口，]，因此明胶材料已广泛地应用于组织工程领域”，5j．有关可降解的高分子微球作为细胞微载体 于多能干细胞和平滑肌细胞的培养”’7J，但此类合成高分子材料表面具有较高的疏水性和生物惰性， 不利于细胞的粘附生长．通过表面化学修饰和表面涂层等方法可以提高材料的细胞粘附性”““．另外 也可以用壳聚糖等材料作为细胞微载体培养细胞”…． 本文采用改良的乳化冷凝法制备出大粒径明胶徽球”“，扫描电镜观察发现该微球在制备和后处 理过程中没有破碎现象，有一定强度和几何形状；内部有孔径和互相沟通的三维孔道结构，具有较好 的缓释性，能有效地促进成纤维细胞的粘附和增殖，因此有望为组织工程中种子细胞的培养提供一种 更为可行和有效的新途径．并可作为微载体支架承载真皮细胞的单元微粒皮替代物”“． 1实验部分 1．1试剂与仪器 质量分数≥25％；氨基乙酸，纯度 99％；丙酮和异丙醇均为市购分析纯；水为二次蒸馏水；兔皮成纤 维细胞，由第四军医大学组织工程试验中心提供． BX-41 型显微镜． 1．2明胶微球的制备 称取0．1 mL掖体石蜡充分搅拌均匀后倒人三口烧瓶中，于60℃高速搅拌．将质 gspan--80，用30 收稿日期：2007,04·16． 基金项目：国家“八六三”计划重大课题专项基金 批准号：2002AA205041 资助． 联系人简介：刘守信，男．博士，教授，主要从事敏感性高分子和软物质研究E-mall：liushx@一,nnu．捌ucn 万方数据万方数据 No．9 王忆娟等：作为细胞微栽体的明胶基缓释徽球的制备 1777 量分数为25％的明胶水溶液真空抽气泡，取4．5mL缓慢滴加到三口瓶中．调节搅拌速度至300r／rain， 搅拌10rain，溶液变浑浊，形成乳状液后在保持搅拌速度不变的条件下迅速改为冰浴，使体系温度低 rain，缓慢滴加戊二醛0．1 r／mln下继续搅拌2h．加入20mL丙酮，搅 于4℃，继续搅拌15 mL，在300 拌3min后静置，淡黄色微球沉淀在最下层，倒掉上层溶液后将微球浸泡在10mL丙酮溶液中，于4℃ 固化24h．取出微球后用1 mol／L的氨基乙酸浸泡30rain，除掉未反应的戊二醛．用丙酮、异丙醇、二 次水反复洗涤，待有机溶剂挥发后得到淡黄色粉末状明胶微球．改变固化方法、水油相比例、搅拌速 度、交联剂、表面活性剂用量和洗球方法等制备大粒径明胶微球。 1．3微球的表观形貌和吸水率的测定 将粉末状明胶微球喷金后用扫描电镜观察形貌，并计算平均粒径．用三种不同的方法进行明胶颗 粒后处理： 1 用丙酮洗涤3次后用水洗涤1次，重复3次后再用丙酮处理，待丙酮挥发； 2 用丙酮 洗涤3次后用异丙醇洗涤1次，重复3次后再用异丙醇处理，待异丙醇挥发； 3 将用丙酮和水洗涤 过的微球在二次水中充分溶胀后冷冻干燥得到干燥球．用扫描电镜观察三种明胶微球的表面形貌． 由于明胶微球的亲水性及其三维网络结构，使其在水中表现出良好的溶胀行为．用称量法测定三 种明胶微球的溶胀动力学曲线．将质量为％的明胶微球浸入25℃