马铃薯gbss_ss_和ss_基因片段的融合及其RNAi载体的构建1（ihRNAi植物表达载体的构建模式图以及使用BLAST选择n个靶位点来设计用于RNAi载体构建的融合基因片段.pdfVIP

中国生物工程杂志 　Ch ina B iotechno logy, 2008, 28 ( 8) : 51～56 马铃薯 gbss、ss Ⅱ和 ss Ⅲ基因片段的 融合及其 RNA i载体的构建 陈国梁 1, 2 　张金文 1 　王 　蒂 1 ( 1 甘肃农业大学农学院　兰州 　730070　2 延安大学生命科学学院　延安 　7 16000) ( ) ( ) 摘要 　颗粒结合淀粉合成酶 GB SS 与可溶性淀粉合成酶 SSS 是淀粉合成的关键酶 ,其活性大小直 接影响着淀粉的直链淀粉 /支链淀粉比例 、淀粉链长及结构等 ,进而影响淀粉品质 。利用 b la st及分 子生物学软件 DNA Star对 g bss、ssⅡ和 ss Ⅲ基因的 cDNA 序列同源性进行分析比较 ,选用 g bss 的 261bp ( ) ( ) ( ) 1～261 , ssⅢ的 244bp 2 164 ～2407 , ssⅡ的 281bp 161～44 1 的 cDNA 片段 ,并应用重叠 PCR 法将其 拼接成一融合基因 g bs s ,构建了以 CaMV 35S启动子驱动的含有 “正向 g bs s 融合片段 p dk 内含子 3 2 3 2 反向 g bs s 融合片段 ”ihRNA i的植物表达载体 ,为培育糊化温度低的马铃薯品系奠定基础 。 3 2 关键词 　RNA i　马铃薯 　融合基因　重叠 PCR 中图分类号 　Q789 ( ) 　　马铃薯 S olanum tuberosum L 淀粉是一种廉价易 能表型的缺失现象 。这一现象属于转录后的基因沉默 ( ) 得的再生性资源 , 已成为许多生产领域的重要原料 ,但 机制 Po st - tran scrip tional gene silencing, PTGS 。利用 在许多应用领域中, 都要求淀粉具有较低的糊化温度 这一技术应该可以有效、特异性降解靶标基因 mRNA , ( ) 和较弱的凝沉性 , 因而淀粉的糊化性和凝沉 老化 性 阻止靶标基因的表达 。近年来 ,有关植物方面的 RNA 成为其应用的重要参考指标 ,而这两种性质主要与直 干扰研 究 已相 当活跃 并 已取 得 了很 大 的进 展 [ 2 ] 。 链淀粉 /支链淀粉 比例 、淀粉链长 以及淀粉 的结构有 GB SS、SSⅢ、SS Ⅱ是马铃薯淀粉合成的 3 种关键酶 ,其 关 [ 1 ] 。因此 ,培育具有较低糊化温度和优 良凝沉特性 活性对马铃薯淀粉的直链淀粉 /支链淀粉比例 、淀粉链 的品种已成为近年来马铃薯品质育种工作的重要 目 长及结构有一定的影响 [ 3～5 ] 。本研究拟以 g bss、ss Ⅲ和 标 。目前 ,马铃薯新品种的培育主要是通过品种间杂 ss Ⅱ基因为靶标 ,分别从中选取部分保守序列并形成融 交和促进芽变来筛选突变体 ,但 由于马铃薯栽培种为