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果 树学报 ， （ ）
２００9 ２6 1 : 108～112
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｆｒｕｉｔ Ｓｃｉｅｎｃｅ
正交设计优化果梅ISSR 反应体系
， ， ，
1 2 3 2 3* 4 4
桂腾琴 ，孙 敏 ，乔爱民 ，王心燕
（1 黔西南民族师范高等专科学校化学生物系， 贵州兴义 562400 ； 2 西南大学生命科学学院， 重庆 400715 ；
3 三峡库区生态环境教育部重点实验室， 重庆 400715 ； 4 仲恺农业技术学院农业与园林学院， 广州 510225 ）
摘 要 以果梅（ ） 品种鸳鸯梅为试材，采用改良的 法提取果梅嫩叶 ， 利用正交
: Prunus mume Sieb. et Zucc. CTAB DNA
设计 （ 5 ）探讨 2+ 、 、引物、 聚合酶及模板 用量对果梅 反应的影响，正交试验的
L16 4 Mg dNTPs Taq DNA DNA ISSR-PCR
结果采用直观分析和方差分析相结合。 建立了果梅的ISSR-PCR 优化反应体系， 在20 μL 反应体系中含2 μL 10×
， ·-1 2+ ， ·-1 ， ·-1 引物， 模板 ， 聚合酶。 在此
Buffer 2.5 mmol L Mg 0.2 mmol L dNTPs 0.32 μmol L 20~80 ng DNA 0.75 U Taq DNA
基础上探讨了引物UBC 840 的最适退火温度、最佳循环次数及延伸时间，引物UBC 840 的最适退火温度为50.6 ℃ 。
应用该优化反应体系，用 个不同引物对 份果梅资源 进行 扩增，结果显示优化的反应体系具有
2 19 DNA ISSR-PCR
较高的稳定性。
关键词：果梅； 简单序列重复区间（ISSR ）； 正交设计； 反应体系
中图分类号： 文献标识码： 文章编号：
Ｓ６６2．4 Ａ １００９－９９８０(２００9)０ 1－108－０5
Optimization of an ISSR reaction system of Japanese apricot (Prunus
mume) based on orthogonal design
， ， ，
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