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HPLC法测定婴幼儿配方奶粉中香兰素 史海良，王浩* （国家食品质量安全监督检验中心， 北京 100094） 摘要 建立了婴幼儿配方奶粉中香兰素的高效液相色谱测定法。方法采用C18（5um，4.6mm×250mm i.d）反相色谱柱，流动相为乙腈和0.02moL/L 磷酸二氢钠溶液(调pH 4.0），流速1.0mL/min，检测波长276 nm，柱温30℃，进样量20 uL。方法定量限10 mg/kg，加标回收率96.9-102.8%，线性范围1.00-50.00μg/mL，相对标准偏差为2.15%。该法具有样品预处理简单,灵敏度高,分析时间短等优点,适用于婴幼儿配方奶粉中香兰素的快速测定。 关键词 高效液相色谱仪，婴幼儿配方奶粉，香兰素 0 前言 香兰素（4-羟基-3-甲氧基苯甲醛)是重要的食品添加剂,其被广泛用作糖果、饼干、糕点、饮料等食品的增香剂 。日前，卫生部公布《食品用香料、香精使用原则（征求意见稿）》，明确把纯乳等20种食品列为禁加食用香料香精范围，其中婴儿配方食品、较大婴儿和幼儿配方食品也拟被“禁香”更是引发业内广泛关注。×250mm；流速：1.0mL/min；柱温：30℃；进样量：20uL；检测波长：276nm；流动相：乙腈+0.02moL/L 磷酸二氢钠溶液（30：70，V/V，冰醋酸调pH 4.0）。 1.3 样品处理 准确25.0 mL 50℃热水溶解，超声10min，用5 mol/L盐酸溶液调节pH值至1.7，放置2 min后，再用mol/L氢氧化钠溶液调节其pH值至4.。将样品溶液至50 mL容量瓶中，用水定容至刻度后，倒入漏斗用快速定性滤纸自然过滤，弃去最初滤液，在50 mL锥形瓶中收集滤液，并充分混匀 1.4 定性定量方法 采用标准物质的保留时间对样品峰进行准确定性，采用外标法以峰面积计算定量，依次配制不同浓度的标准溶液进样分析,以质量浓度(μg/ml)为横坐标,以峰面积为纵坐标绘制标准曲线。 2 结果与讨论 2.1 前处理方法的优化 婴儿配方奶粉中蛋白质含量较高，因此，本方法先用50℃热水超声提取，再经酸沉蛋白后直接用测定。实验证明，该法操作简单，易于推广，加标回收率大于96.0%，可以满足婴儿配方奶粉中的香兰素日常检测要求。 2.1 色谱条件的优化 据文献报道，可用于分离香兰素的色谱柱主要包括C18和C8柱。本文分别采用上述两种色谱柱进行分离试验，发现金欧亚ODS色谱柱对香兰素具有较好的分离效果；香兰素属于中等极性化合物，为了有利于色谱峰的分离及峰形的改善，选用乙腈+0.02moL/L 磷酸二氢钠溶液（30：70，V/V，冰醋酸调pH 4.0）为流动相进行洗脱；对香兰素标准溶液用紫外光谱仪进行扫描,发现其在276nm处有共同较大吸收峰；进样量大可提高测定的灵敏度,实验中发现,当进样量达到20 uL时,峰形较好。综合以上色谱条件的测定结果令人满意(如图1所示)。  图1 加标样品（加标100 mg/kg）的色谱图 2.2 标准曲线线性范围和方法检测限 将逐级稀释的标准工作液分别进样20μL，测定结果经线性回归，线性范围：线性范围：1.0-50.0 μg/mL；回归方程（y为峰面积，x为浓度，μg/ml）： y=37.799 x-24.391，线性相关系数：0.9999。 进空白样,以基线3倍噪声值在标准曲线查得结果计算,按测定方法计算,本方法最低检出量为10 mg/kg。 2.3 方法的回收率和精密度 称取空白样品6份,每份5.00 g,分别添加香兰素标准品0.05 mg和0.5 mg,按供试品制备方法处理后,进行测定, 结果见表1。从表中可看出,样品加标回收率96.9%-102.8%,平均相对标准偏差为2.15%（n=6）。 表1 加标样品回收率（%）与相对标准偏差（%） 样品编号 添加浓度(mg/kg) 检测浓度(mg/kg) 加标回收率（%） 1 10.0 9.92 99.2 2 10.0 9.69 96.9 3 10.0 10.28 102.8 4 100.0 101.60 101.6 5 100.0 101.50 101.5 6 100.0 99.40 99.4 3 结论 建立了婴幼儿配方奶粉中香兰素的高效液相色谱测定方法。该法样品经酸沉蛋白后直接用HPLC法进行测定, 样品加标回收率96.9%-102.8%,平均相对标准偏差为2.15%（n=6）, 适用于婴幼儿配方奶粉中香兰素的快速测定。 参考文献 [1]景丽洁，韩伟，闫光烈.用反相高效液相色谱法测定香兰素含量.食品科学，2006,27(4):205—207 [2]张国文，倪永年. 多元校正-光度法同时测定食品中香兰素和乙基麦芽酚. 分析科学学报，2005，21（1）：20-23 Detecti