不同发育时期胎儿胸腺和肝脏组蛋白H1的分离及其性质1).pdf

遗传 HERED,[TAS(Beiiing) 6(3);31-341984 不同发育时期胎儿胸腺和肝脏组 蛋白H1的分离及其性质’‘ 王孟淑 洪光远 北（京大学生物系） 一般认为，组蛋白在基因表达中起着非专 组织。滤液用Beckman(J,-21)型冷冻离心机 一性的调节作用。Marsh]等认为，组蛋白H1 于一100C4,000g离心20分钟，弃上清液。沉 是DNA合成的阻遏物。Gjerset[z，等指出，H，可 淀加人上述溶液300毫升，按上述方法重复提 能与染色质的超螺旋形成有关。 取4次，得到无色的染色质沉淀。 H，是一组含丰富赖氨酸的组蛋白，它在酸 于染色质中加人100毫升0.75M的高氯 和盐溶液中容易与DNA分离并溶解于高氯酸 酸，在研钵中研磨5分钟，3,500g冷冻离心25 溶液中。H：是5种组蛋白中最特殊的一种蛋 分钟。收集上清液，沉淀再用500毫升0.75M 白质，其显著特点是具有多态性，正是由于这个 高氯酸按上述方法重复抽提1次。 合并上清 原因，其完整的氨基酸顺序至今尚未搞清。 液，依次用G-2,G-4烧结玻璃漏斗过滤。滤液 迄今，对哺乳类动物H，的理化性质、多态 加人3.5倍体积冷的酸性丙酮 (70毫升丙酮加 性及种属、组织器官专一性等方面已有不少报 0.1毫升浓盐酸）。冰箱放置 16小时，15,000g 道1,〔3,4,8,10]。但是，还未看到关于人的胎儿发育 离心25分钟，收集沉淀，即为组蛋白H,。于上 过程中H，的研究资料。我们采用0.75M高氯 清液中再加人原始体积2.5倍的冷丙酮 总（计6 酸提取的方法，从3-4,5-6,7-8月龄3种 倍体积），出现大量沉淀，内含大部分H,及少量 不同发育时期流产胎儿胸腺和肝脏中提取制备 非组蛋白。按照 Sterner等人11［1，的方法，将所得 了组蛋白H,，比较了它们的电泳行为和氨基酸 到的蛋白质沉淀进行 CM-SephadexC25层析则 组成，以期探索胎儿发育过程中H，的变化。 可将H：和其他蛋白质分开。 SDS聚丙烯酸胺凝胶电泳参照laemmlilsj的 材 料 和 方 法 方法进行。 采用 Tris-HCI不连续pH电泳系 流产胎儿取自北京海淀医院妇产科，分别 统进行。垂直平板电泳，8.5X9.5X0.2厘米 收集3-4,5-6,7-8月龄3个发育时期的胸 和7X7X0.1厘米两套装置平行进行电泳。胶 腺和肝脏，于一20℃冰箱保存。 浓度为15多。样品按 1毫克／毫升溶于含 1外 组蛋白H：的提取方法均按nrSa9de]s[ 的方 SDS,1务户疏基乙醇的Tris-HCI缓冲液中，于 法进行，稍有修改。现以5-6月龄胎儿肝脏 H1 沸水浴中加热3分钟，冷至室温。大电泳胶片 的制备为例加以说明。全部操作均在。-4℃下 进行。胎儿肝脏 125克，剪刀剪碎，加人冰冷的 WangMengshuetal.-Studieson HistoricFitfrom FetalThymusandLiverduringDifferentDevelop- NaCI-EDTA溶液 含（0.14M NaCl,0.025M mentPhases EDTA0.1mMPMSF2]300毫升，于组织匀浆器 1）本文经沈同教授和昊鹤龄副教授审阅，特此致谢。 2)PMSF是Phenylmethylsulphonylflouride的缩写形 内慢速匀浆30秒钟，两层纱布过滤，除去结缔 式。