中药复方四逆散水煎物HPLC指纹图谱研究.pdf

中药复方四逆散水煎物HPLC 指纹图谱研究 李廷利，黄玉新，都晓伟∗ （黑龙江中医药大学，哈尔滨 150040） 摘 要：用HPLC方法，使用kromasil －C18 色谱柱（4.6mm╳250mm ，5 μm ），以乙腈－0.05 ％磷酸水梯度洗脱，检测波长为240nm 、210nm ，流速为 1.0ml/min构建了复方四逆散水煎 物HPLC指纹图谱，对指纹图中四个主要成分峰进行了初步定性，为其质量控制提供参考， 并为其化学成分研究奠定基础。 关键词：四逆散；指纹图谱；HPLC 四逆散源出汉代张仲景《伤寒论》之方剂，由柴胡、白芍、枳实、 甘草四味药物组成。为和解少阳，调和肝脾的基础方剂，有解郁透热， 疏肝理脾，宣散气血郁滞之功。近年来，经药效学研究发现中药复方四逆散 [1] 水煎物具有镇静催眠作用，其在改善睡眠、提高睡眠质量方面具有独特的疗效 ， 但对其改善睡眠作用的药效物质基础研究国内外未见报道。中药指纹图谱技术是 一种综合的、可量化的化学鉴定手段，它的出现为综合分析中药复方化学成分提 供了技术方法[2][3] 。本文采用HPLC方法，建立了四逆散水煎物的指纹图谱，尽可 能较为全面地反映其整体的化学成分，为中药复方四逆散水煎物的药效物质研究 以及质量控制奠定基础。 一、材料及设备 1.仪器设备 Waters 2695－2966高效液相色谱仪、H66MC型超声振荡仪。 2.药品及试剂 乙腈(HPLC 级，美国 DIKMA 公司提供)，水(Millipore water purification systems 制备)、磷酸(优级纯，北京益利精细化学品有限公司提供)。对照品柴 胡皂苷 a、柴胡皂苷 d、甘草酸单铵盐 (纯度均为 98 ％以上，由成都思科华生物 技术有限公司提供) ；橙皮苷（批号 110721－200211 ）、柚皮苷（批号 110722－ 200309 ）、芍药苷（批号 110736－200422 ）由中国药品生物制品检定所提供。 3.药品 柴胡（伞形科植物柴胡 Bupleurum chinense DC. ）：购于河北省安国市康信义 药材行，产地：陕西；白芍（毛茛科植物芍药 Paeonla lactiflora pall. ）、炙枳实（芸 香科植物酸橙 Citrus aurantium L.）、炙甘草（豆科植物甘草 Glycyrrhiza uralensis Fisch ）购于哈尔滨市世一堂中药饮片厂。以上药材均由黑龙江中医药大学生药 学教研室都晓伟教授鉴定。 二、方法与结果 1.样品制备方法 按原方配比（各药等量）称取药材共 200g ，加入 5 倍量水，浸泡 1h，煎煮 2 次，第一次 30min，第二次 20min ，合并滤液于 70℃水浴浓缩至干，精密称取 四逆散水煎物细粉0.1132g （相当于四逆散生药0.4g ）置于25ml 容量瓶中，加入 ∗基金项目：国家高技术研究发展计划项目“改善睡眠作用的中药新药评价方法的建立及新药研究” （2003AA2Z3523 ） 李廷利（1957－），男，黑龙江中医药大学中药药理教研室主任，教授、博士生导师长期从事中药药理研究 工作。 ∗∗通讯作者：都晓伟（1962－），女，黑龙江中医药大学生药学教研室主任、教授。Tel ：0451 Email ： xiaoweidu@ -1- 70 ％甲醇 20ml ，密闭超声 40min ，定容至刻度，0.45μm 滤膜过滤，HPLC 进样 量 10μl 。同操作制备样品 10 批。 2.色谱条件考察 2.1色谱柱的选择 选用中科院大连物化所Hypersil C18色谱柱(4.6mm ×250mm ，5μm) 、大连依 利特分析仪器有限公司Kromasil C18色谱柱(4.6mm ×250mm ，5μm)和Lichro