反相高效液相色谱法直接测定葡萄酒中非挥发酸.pdfVIP

应用实例 反相高效液相色谱法直接测定葡萄酒中非挥发酸 王吉顺 关家锐 邓丛蕊 管锡键 王树仁 （ㄉ山蕉东大学实验中心，济南，250100） 葡萄酒中有机酸，一部分来源于葡萄汁，另一部 （二）定量可靠性的讨论 分则是葡萄汁发酵过程中的副产物。葡萄酒中有机 将各有机酸标样用pH为3.0的蒸馏水配制成 酸的含量是葡萄酒质量检验的重要指标之一[]，它 标准溶液，尔后经逐次稀释配制成标准系列工作液， 对口感起决定性作用，是决定葡萄酒风味的重要因 测量各种有机酸在各浓度下的峰面积，将所得数据 素。对葡萄酒中有机酸的分析测试方法较多，例如酸 进行回毓归分析，求出各种有机酸的回归方程及相关 碱滴定[1]、比色分析[2]荧光分析[3]酶法测定[]、衍 系数列入表1。从表1数据可见，各有机酸在此测定 生化色谱分离[5等。近年来Blanco[6]、Marce[7]用双柱 条件下呈现较好的线性关系，直线基本通过原点，最 串联的方法，直接进样分析了葡萄酒中的有机酸。 小检测下限为110-5(/V)。 本文介绍用ODS色谱柱直接进样测定葡萄酒中 七种有机酸，讨论了影响测定的各方面因素。本法具 有速度快、操作简便、样品不经处理等特点，足以满 足葡萄酒中有机酸的测定要求。 实验部分 （一）仪器及试剂 美国Varian 5060LC高效液相色谱仪，UV-100 紫外检测器，Model 05830-00型pH计。各种有机 酸标准品均为分析纯（其中苹果酸经重结晶处理，三 次蒸馏水自制）。 （二）色谱条件 色谱柱：MICROPAK MCH-5(150mm 4.4mm i. d.)，柱温25，检测波长200nm灵敏度0.05AUFS， 流动相为三次蒸馏水（用H3PO3调至pH=3.0，流 速0.8ml/min，进样量10l(酒样经0.45m滤膜过 滤)。 实验结果与讨论 （一）色谱条件的选择 在实际酒样的测定基础上，定量加入各种有机 我们用不同pH值的水作流动相，对标准样品及 酸，测定添加回收率及定量结果的重复性，数据见表 酒样进行了分离。实验证明，pH为3时，各有机酸的 2。除柠檬酸外，各有机酸的添加回收率均在95%以 分离和保留时间浣较佳。因各有机酸的极性较强，在 上，变异系数均小于3%(n=5)，说明葡萄酒中其它 ODS柱上保留时间较短，故采用低流速可适当提高 物质对分析结果无干扰，定量结果可靠。但柠檬酸定 分离效率，且考虑分析时间不应过长，实验中选择流 量准确性欠佳。 动相的流速为0.8ml/min较为适宜。色谱图见图1。 表1 工作曲线及最小检测限 表2回收率的重复性实验数据 （三）实际样品定量分析 任取8种葡萄酒作为试样，用上述方法测定各 种有机酸的含量，数据列入表3。除个别葡萄酒中柠 檬酸无法定量测定外，其它有机酸均能较好定量。 表3商品葡萄酒样品测试结果（标准单位，g/L） 为了将上述测定结果与标准方法测定结果进行 togr.,222(1)