复方磺胺甲恶唑的含量测定.docVIP

高效液相色谱法测定复方磺胺甲噁唑片的含量 ［实验目的］ 1掌握高效液相色谱法测定复方磺胺甲噁唑片的含量的基本原理 2掌握高效液相色谱仪的操作及注意事项 ［实验原理］ 结构特点：苯环（紫外吸收）、芳伯胺基（重氮化-偶合反应）、磺酰胺基上的活泼氢有一定酸性，可与碱成盐或与重金属离子反应。分子式：C10H11N3O3S 分子质量：253.28。本品为白色结晶性粉末。熔点167℃，易溶于稀盐酸；氢氧化钠溶液或氨水，几乎不溶于水。无臭，味微苦。外标法是以待测组分的纯品作为对照品，以供试品中待测组分的峰面积或峰高进行定量分析，本实验采用峰面积进行定量。分别精密量取一定量的对照品和供试品配制成溶液，分别进相同的体积的对照品溶液和供试品溶液，在完全相同的色谱条件下进行色谱分析，测定峰面积。 ［实验仪器、试剂］ 仪器：75-4型紫外可见分光光度计 (上海分析仪器厂 高效液相色谱仪紫外吸收检测器复方磺胺甲唑片( ,批号 )，甲氧苄啶，磺胺甲噁唑，甲醇（色谱纯）,水（超纯水），乙腈(色谱纯)，三乙胺 (色谱纯)，醋酸溶液（1→100）用醋酸溶液（1→100）调节pH值至5.9±0.1甲氧苄啶与磺胺甲噁唑峰之间的分离度应大于5.0。甲氧苄啶峰与磺胺甲噁唑峰的拖尾因子均不得过2.0。测定法 50ml容量瓶中（约相当于磺胺甲噁唑0.g），置0ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，置0ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀， 对照品 供试品 磺胺甲噁唑的浓度（C） 磺胺甲噁唑的峰面积（A） C（对）/C（供）=A(对)/A（供） ［注意事项及参考文献］ 1 .开机前先将流动相过滤和超声 2 过滤时有时会出现流动相漏液。操作时，应先向滤瓶内倒入少量流动相，观察是否漏液并开始过滤，若未漏液，再向滤瓶中添加流动相。 3 超声时，瓶外液体的液面应高于瓶内流动相的液面，否则流动相内的气体可能无法排出液体，气体仍然残留在流动相内，以致开机排气时无气泡排出。 4 开机排气结束后，应先将流动相流量调小，再关闭排气阀，否则会导致柱压瞬间升高超过压力上限，致使泵停止工作。 5 .反相高效液相色谱仪冲洗柱子时，应尽量避免使用纯水流动相冲洗柱子，因为水极性强，会损害色谱柱（反相高效液相色谱仪的色谱柱C18是非极性的），导致柱效下降。 6.冲洗色谱柱时，还可辅助以不同比例的混合流动相冲洗色谱柱，以冲出不同极性的残留物质，但最后还是要用纯有机流动相冲洗色谱柱一段时间。 7 在实验过程中会出现压力超过上限或压力偏高（在压力上限范围内有机流动相和水流动相流速之和无法达到1ml/min），有可能是柱内有残留物质未被冲出，此时应用较大流速（≤1ml/min）的有机流动相充分冲洗色谱柱。若条件允许，也可采用梯度洗脱的方式冲洗色谱柱。压力过高也有可能是滤头堵塞，此时可将滤头取出放到有机溶剂中超声。 8 若隔天或更长时间不使用液相色谱仪，应将两流动相瓶中均倒入纯的有机流动相（因为水流动相长时间不用会滋生细菌，污染滤头和色谱柱，导致下次开机使用时会出现鬼峰，基线不稳）。 9 .进样时所进样品的体积应不小于色谱柱的最大容积，且进样时注射器里的气泡一定要排出，不可将气泡打进色谱柱。 参考文献：《中华人民共和国药典》2010年版