大肠杆菌的毛细管电泳行为研究.pdf

V01．30 第30卷专辑 南昌大学学报(理科版) Suppl of 2006年9月 Journal University(NaturalScience) Nanchang Sept．2006 文章编号：1006—0464(2006)专辑一0702一Ol 大肠杆菌的毛细管电泳行为研究 邰 怡1，黄汝锦1，庄峙厦1一，陈石1，王翊如1，王小如1，2 (1．厦门大学化学化工学院化学系，现代分析科学教育部重点实验室，福建厦门361005； 2．国家海洋局第一海洋研究所，青岛市现代分析技术与中药标准化重点实验室，山东青岛266061) 中图分类号：0657 文献标识码：A 大肠杆菌的分析鉴定在临床诊断、环境控制等 涡旋振荡可暂时打破细菌聚集和叠连，使其以单细 领域具有重要的意义。目前可采用聚合酶链式反应 胞分散的形式存在。 (PCR)、质谱、荧光和光纤光谱等现代分析技术，从2．2缓冲溶液pH的影响 细胞的组成水平、蛋白质水平和DNA水平对细菌进 改变缓冲液的pH，将影响细菌表面的羧基、磷 行分析鉴定。但由于细胞组成成分的多样性和复杂 酸盐、亚磺酸盐等功能基团的质子化或去质子化，从 性，同时，细胞成分易受生长阶段和环境因素的影 而改变细菌的电荷体积比，影响细菌的电迁移行为。 响，因而，仅通过分析细胞的分子组成进行细菌鉴定 大肠杆菌在不同pH下的电迁移如图1所示。当 具有一定的局限性，易造成假性结果；通常需要联合 pH为6．35时，大肠杆菌表面去质子化的程度较低， 多种分析技术并进行较为繁琐费时的生化测试、血 电迁移速率较小，随着pH的升高，表面基团去质子 清学分析¨“1。 化程度提高，负电荷增多，电迁移速率加快。当缓冲 由于细胞表面基团的质子化或去质子化以及表 液的pH高于8．4后(8．4一11．4)，大肠杆菌表面 面吸附溶液中的离子，细菌在直流电场的作用下将 的功能基团已完全去质子化，形成较均一的负电荷 发生定向迁移，因而，将细菌细胞作为完整的整体， 氛围，迁移速率基本达到稳定值。 利用毛细管电泳技术可对其进行直接分析。由于细 8 菌自身的特点以及易受微环境的影响，电泳结果受 实验条件影响较大，给分析鉴定带来较多的困 尝 难”’。基于此，本文对影响大肠杆菌电泳行为的前 毒 7 处理方式、离子强度、pH等条件进行了考察。 l实验部分(略) 妻 6 2结果与讨论 6 7 8 9 lO ll 12 2．1 大肠杆菌前处理方式对其电迁移的影响 pH 不同生长期的大肠杆菌，细胞表面特性存在一 圈I pH对大肠杆菌表观电泳淌度的影响。缓冲溶液：1． 定差异，同时，菌液保存时间较长会使部分细胞溶 125mmol／LTris／1．125mmol／L mmol／LEDTA H3B03／0．025 解、聚集、产生分泌物，从而影响大肠杆