第六章双水相萃取.pptVIP

（一）目的物的萃取 1、如果目标产物在上相中的分配系数足够大，则细胞匀浆液中的目标产物可采用一步或两步双水相萃取工艺获得较高的纯化倍数。 一步双水相萃取：是把生物材料悬浮液和双水相系统混合后，其中下相含有大多数杂质，而上相含目标产物。 两步双水相萃取：把一步萃取体系中的上相分离出来后，再加入盐使其形成新的双水相体系，则富含PEG的上相得到回收，同时，含有目标产物的盐相通过超滤等操作得到分离目标。 三步双水相萃取酶的流程示意图 2、如果细胞匀浆液中的目标产物的分配系数较小，则可采用多步双水相萃取工艺以获得较高的纯化倍数。 （二）PEG循环 在大规模双水相萃取过程中，成相材料的回收和循环使用，不仅可以减少废水处理的费用，还可以节约化学试剂，降低成本。 PEG的回收有三种方法： ①加入盐使目标产物转入富盐相来回收PEG； ②将PEG相通过离子交换树脂，用洗脱剂先洗去PEG，再洗出蛋白质。 ③超滤 （三）无机盐的循环 一种方法使将含磷酸钠的盐相冷却到6℃，使盐结晶析出，然后用离心机分离收集； 另一种方法是用电渗析法、膜分离法回收盐类。 二、大规模双水相萃取及其简单设备 两步萃取法连续分离胞内酶的流程示意图 第三节 双水相萃取技术在生物、食品工业中的应用 （1）提取酶和蛋白质。 （2）进行萃取性生物转化 （3）酸水解产物中提取二肽、氨基酸、核苷酸等风味物质 （4）萃取细胞、细胞器、膜等粒子 （5）应用于液－液分配层析 双水相的应用举例 分离和提纯各种蛋白质(酶） 用PEG/ -(NH4) 2SO4 双水相体系,经一次萃取从α- 淀粉酶发酵液中分离提取α - 淀粉酶和蛋白酶, 萃取最适宜条件为PEG1000 ( 15 %) -(NH4) 2SO4 (20 %) ,pH = 8 ,α- 淀粉酶收率为90 % ,分配系数为19. 6 ,蛋白酶的分离系数高达15. 1。比活率为原发酵液的1. 5 倍,蛋白酶在水相中的收率高于60 %。 提取抗生素和分离生物粒子 采用PEG/ Na2HPO4 体系提取丙酰螺旋霉素，最佳萃取条件是pH= 8. 0～8. 5 ， PEG2000 (14 %) / Na2HPO4 (18 %) ,小试收率达69. 2 % ,对照的乙酸丁酯萃取工艺的收率为53. 4 % 第四节 双水相萃取分离技术的发展方向 一、开发廉价的新型双水相体系 例如：用粗dextran、变性淀粉、糊精、 乙基羟乙基纤维素等取代葡聚糖（dextran ） 二、双水相分配与相关技术的集成化 集成化 ：不同分离技术上的相互渗透、实现优势互补，而达 到整体优化的目的。 具体表现3个方面： 与常规技术结合解决双水相萃取本身的难点问题 引进其他分离技术进行融合以提高分离效率，简化分离过程 为已有的技术提供新的思路 实验（设计型） 设计一个PEG/磷酸盐的双水相体系，并从番木瓜中初步萃取木瓜蛋白酶。 思考题 名词解释：聚合物的不相容性；相图。 双水相体系的是怎样形成的？其组成是什么？ 影响双水相萃取的因素有哪些？ 双水相萃取技术有什么优越性？ * 利用物质在互不相溶的两水相间分配系数的差异来进行萃取的方法。 双水相萃取？ 双水相的形成 将两种不同的水溶性聚合物的水溶液混合时，当聚合物浓度达到一定值，体系会自然的分成互不相溶的两相，这就是双水相体系。这种含有不同聚合物分子的溶液发生分相的现象叫聚合物的不相容性。 形成原因：由于高聚物之间的不相溶性，即高聚物分子的空间阻碍作用，相互无法渗透，不能形成均一相，从而具有分离倾向，在一定条件下即可分为二相。 常用的双水相体系 高聚物/高聚物体系：聚乙二醇(简称PEG) / 葡聚糖(简称Dextran) 高聚物/无机盐体系：硫酸盐体系。常见的高聚物/ 无机盐体系为: PEG/ 硫酸盐或磷酸盐体系。 双水相系统(aqueous two-phase system, ATPS) PEG = 聚已二醇(polyethylene glycol) Kpi = 磷酸钾 DX = 葡聚糖(dextran) 双水相萃取的原理 是生物物质在双水相体系中的选择性分配，当物质进入双水相体系后，由于表面性质、电荷作用和各种作用力（如憎水键、氢键和离子键等）的存在和环境的影响，使其在上、下相中的浓度不同，即分配系数不同。 第一节 双水相分离理论 双节线：把均相区和两相区域分隔开。 系线：连接双节线上两点的直线。 均相区 两相区 在同一条系线上的各点分成的两相具有相同的组成， 但体积比不同 临界点：当系线长度趋向于零时，即在图中的C点，两相差别消失，任何溶质在两相中的分配系数均为1，成为单相体系。 ATPS相图 双节线(bi-nodal)