尿酸酶突变体的高通量筛选方法.pdfVIP

西北大学学报(自然科学版) 2015年2月，第45卷第1期，Feb．，2015，V01．45，No．1 』竺坚翌堂堂盟!苎垦!!坠堕翌i!!垡i堕(盟!!坠鲤墨!i!翌!!垦型i!i竺翌2 生命科学 尿酸酶突变体的高通量筛选方法 廖 娟1，刘红博2，高 昂2，杨晓兰2，李元丽2，廖飞2 (1．重庆医科大学附属永川医院中心实验室，重庆402160；2．重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学 教育部重点实验室，重庆400016) 摘要：建立一种尿酸酶突变体的高通量筛选方法。将野生型苛求芽孢杆菌尿酸酶及其突 变体的表达载体转入大肠杆菌，每个克隆诱导培养后超声裂解上清液为样品，全自动酶标 仪测定293 nm光吸收，并分析反应启动后8～28min的数据计算酶活性，Bra怕rd法测定 总蛋白；ROC比较用酶活性或比活性识别阳性突变体的可靠性。任2种突变体酶活性或 比活性比值2时，ROC分析曲线下面积接近l；当酶活性或比活性仅增加50％时，分析 比活性所得曲线下面积比分析酶活性更大，将ROC分析比活性提高近1倍。突变体敏感 度达90％时，比活性为判断阳性突变体阈值，其相当于以起始物比活性均值加1．7倍标 准差；此阈值能用于高通量筛选变体库中比活性增加1倍以上的阳性突变体。 关键词：尿酸酶；比活性；阳性突变体；通用阈值 中图分类号：Q55 文献标识码：A DoI：10．16152／j．cnki．xdxbzr．2015旬1旬18 A methodfor Uricase recognizing lligh·throughput mutantsof lligheractivity UA0 Fei2 Yuan一1i2，UAO Juanl，UUHong—b02，GAOAn92，YANGXiao—lan92，U Medical 402160，China； (1．CentralL丑boratory，ofYongchuanHospital，ChongqingUniversity，Chongqing of oftheEducation ofL小omtoryMedicine， Clinical【JaboratoryDiagnostics Ministry，CoUege 2．KeyLabomtory Medical 400016，China) ChongqingUniversity，Chongqing anautomatic met}lodwas to reader，a screening deVelopedrecog- Abstract：Usingmicmplatehigh—thmughput were nizeuricasemutantsof The vectorsof uricaseanditsthreemutants higheracti