酶联免疫吸附法测定红细胞内多聚谷氨酸化甲氨蝶呤浓度的方法建立及其初步应用.pdfVIP

中国医药导报 2015年 1月第 12卷第3期 窑药品检验 窑 酶联免疫吸附法测定红细胞内 多聚谷氨酸化甲氨蝶呤浓度的 方法建立及其初步应用 牟方祥 吴 红 王 恒 邹德生 王 勇 方勇飞 第三军医大学第一附属医院中西医结合科袁重庆 400038 [摘要] 目的建立检测红细胞内多聚谷氨酸化甲氨蝶呤渊methotrexate polyglutamates袁MTXPG冤的酶联免疫吸附测 定法渊ELISA冤方法遥 方法 将含有MTXPG的红细胞采用冻融法尧化学裂解法尧酶法尧超声破碎法等方法裂解袁加 入血清与裂解液在抗坏血酸尧巯基乙醇保护液作用下将MTXPG转化为甲氨蝶呤渊methotrexate袁MTX冤袁转化液采 用高氯酸尧三氯乙酸及饱和硫酸铵溶液沉淀蛋白袁最后将溶液pH值调整为3.0~9.0袁采用ELISA检测MTX浓度遥 经方法学考核后袁检测临床标本对方法准确性进行评价遥 结果 发现冻融法与冻融法裂解红细胞显著优于酶法 和化学裂解法渊P 0.05冤袁抗坏血酸配制的保护液明显优于巯基乙醇渊P 0.05冤袁转化液37益孵育3 h时MTXPG 转化完全袁高氯酸尧三氯乙酸尧饱和硫酸铵溶液3种蛋白沉淀剂无明显差异渊P 0.05冤袁最适pH为6~8袁最佳pH 值为 6.8遥 浓度在0.2耀10.0 ng/mL范围内线性关系良好 渊r=0.9967冤袁 回收率为96.6%~103.3%袁RSD 为 8.0%~ 14.3%袁日内差异为1.7%~11.7%袁日间差异为7.4%~13.5%袁RSD均小于 15%遥检测患者红细胞内MTXPG浓度为 渊64.75依28.45冤ng/mL遥 结论 建立的红细胞内MTXPG 的ELISA法有良好的准确性和特异性袁 方法操作简单易 行袁可用于临床红细胞内MTXPG浓度的监测遥 [关键词] 多聚谷氨酸化甲氨蝶呤曰甲氨蝶呤曰固相酶联免疫吸附法曰裂解 [中图分类号] R593.22 [文献标识码]A [文章编号] 1673-7210渊2015冤01渊c冤-0091-04 A novel method to establish and its preliminary application for determi鄄 nation of concentrations of methotrexate polyglutamates in erythrocytes by enzyme-linkedimmunosorbent assay MU Fangxiang WUHong WANGHeng ZOUDesheng WANG Yong FANG Yongfei Department of Integrated Traditional and Western Medicine, the First Affiliated Hospital of the Third Military Medical University, Chongqing 400038, China [Abstract] Objective To establish a novel method that determines concentrations of methotrexate polyglutamates (MTXPG) in erythrocytes by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Methods MTXPG-containing erythrocytes were lysed with a series of different methods, including freeze-thawing, chemical lysis, enzymatic lysis, ultrasonication. MTXPGwas transformed into methotrexate (MTX) in