慢病毒介导新型TetOn系统调控大鼠GDNF和TH双基因表达对帕金森病大鼠的实验研究.pdfVIP

中国药理学通报　 Chinese Pharmacological Bulletin　 2015 Feb;31(2):251~6 ·251· 网络出版时间:2015-1-9 13:37　 网络出版地址:http:/ / / kcms/ doi/ 10.3969/ j.issn.1001-1978.2015.02.021.html 慢病毒介导新型Tet-On系统调控大鼠GDNF和 TH双基因 表达对帕金森病大鼠的实验研究 1,2,4 2,3,4 2,4 2,4 3,4 1 1 1 张　 阳 ,张志坚 ,俞晓岚 ,陈东平 ,吴秀丽 ,王志红 ,陈祖盛 ,陈秋红 (福建医科大学1. 基础医学院、2. 神经生物学研究中心,福建福州　 350108;3. 福建医科大学附属 第一医院,福建福州　 350004;4. 福建省神经病学研究所,福建福州　 350005) doi:10.3969/ j.issn.1001-1978.2015.02.021 TH和GDNF基因并且能被调控表达是 PD基因治 文献标志码:A 文章编号:1001-1978(2015)02-0251-06 疗的理想方法[1-2]。 用于调控哺乳动物细胞基因表 中国图书分类号:R-332;R322．81;R373．9;R394．2;R745．7; 达的Tet-On系统虽表现出很好应用前景,如诱导剂 R978．14 强力霉素(Dox)高效、无毒,在时间上准确调控外源 摘要:目的　 观察改良Tet-On 系统修饰慢病毒(Lv-TH-GD- [2] 基因表达等 ,但亦有不足,主要体现在相对高的 NF)目的基因的表达调控及纹状体内直接转移对帕金森病 [3-6] 基础活动 。 Tet-On系统由两部分组成,四环素 (PD)大鼠的作用。 方法　 ①用 Lv-TH-GDNF 与 rtTA2s-M2 调控的反式作用子 (rtTA)与四环素应答元件 病毒感染 HeLa 细胞,免疫印迹法检测强力霉素(Dox)对 TH、GDNF基因表达的调控。 ②用 Lv-TH-GDNF 与 rtTA2s- (TRE)。 研究表明,Tet-On系统缺陷与rtTA结构不 M2病毒共同注射到PD大鼠患侧纹状体,Dox诱导目的基因 完善[3-6]以及TRE 启动子人巨细胞病毒最小启动 [3,7] 表达。 通过观察阿扑吗啡(APO)诱导旋转行为、黑质多巴胺 子(PminCMV)自身激活 有关。 在前期实验里, 能神经元数量、患侧纹状体 DA、DOPAC 含量评估 Lv-TH- 我们采用改良Tet-On修饰的慢病毒载体系统,即rt- GDNF治疗效应;通过移植侧纹状体内TH与GDNF蛋白量 [4,8] [3] TA2s-M2 替代rtTA;小鼠白蛋白启动子(Palb) 评估外源基因在体内的表达。结果　 ①在体外HeLa细胞实 替代PminCMV,把TH和GDNF双治疗基因通过一 验,仅Dox 阳性组见TH、GDNF蛋白条带。②在动物体内实 个内部核糖体进入位点(IRES)构建于Palb 的下游, 验,病毒移植4周后,与PBS对照组相比,仅病毒+Dox组大 获得重组慢病毒穿梭质粒pRRL-Palb-TH-IRES-GD- 鼠旋转行为明显改善(P0．01 ),损伤侧黑质致密部TH 阳 NF,并