西洋参表达序列标签(EST)文库构建及其功能分析.pdfVIP

质量标准研究到新药研发以及推广肉苁蓉和管花肉苁蓉的大面积栽培等方面做了大量的工作，对肉苁蓉的 产业发展、临床用药和资源保护起到了积极的作用，特别是管花肉苁蓉收入《中国药典》，使管花肉苁蓉 成为合法的中药材，有效地促进南疆地区经济发展和农牧民脱贫致富，取得了很好的经济效益、社会效益 和生态效益。但肉苁蓉的很多问题尚需进一步研究，如作用机理的进一步阐明、新用途的发现、更多新产 品的开发、大面积高产、稳产栽培技术问题等，我们将与全国同仁继续共同努力，官产学结合，做强做大 肉苁蓉产业。 致谢 本研究得到了国家科技部、原国家经贸委、自然科学基金委员会、教育部、卫生部、国家中医药管理 局、新疆自治区科技厅的经费资助，在此致以衷心的感谢。同时感谢和田地区、于田县、阿拉善盟等政府 领导在项目研究过程中给予的大力支持。 蒲小平教授、宋志宏博士、雷丽博士、姜勇副教授、贾存勤博士、鲍忠老师、蔡鸿老师、刘晓明博士 生、杨明钧教授、王英博士等参加各部分的工作，在此一并致以谢意。 西洋参表达序列标签(EST)文库构建及其功能分析 陈士林★l，张晓伟2，宋经元1，李滢1，李晨吉2，孙永巧2，李西文1，姚辉1，胡松年2 1．中国医学科学院中国协和医科大学药用植物研究所北京100094 2．中国科学院北京基因组研究所北京101318 摘要：西洋参为五加科人参属名贵药材，世界年需求量约3600吨，贸易额达4000万美元，临床和保健的市场经济价值巨 大，其化学、药理、栽培等研究较多，但功能基因的研究尚未见报道。本文采用表达序列标签(EST)技术开展西洋参功能 基因挖掘的研究，成功地建立了四年生西洋参根的EST文库，通过BLAST与GeneOntology分析获得与人参皂甙生物合成相 关的基因序列11个，这些基因的发现为进一步克隆基因全长、研究基因功能及其开发利用、改良西洋参品质提供了依据。 通过对EST文库功能分析，发现了6个与生长素调节生长发育相关的基因，表明生长素在西洋参根的生长发育过程中起重要 调控作用，为研究西洋参生长缓慢的分子机制奠定了基础。另获得与水分胁迫相关的基因7个，与编码抗氧化酶相关的基因 6个，均与西洋参对环境胁迫的响应有密切关系，在西洋参适应环境的过程中起重要的分子应答作用。而且。从西洋参根的 可能是其他物种尚未报道的新基因。可见，EST技术作为功能基因组研究的重要手段可在西洋参功能基因的开发与研究中发 挥重要作用，在分子水平上对西洋参优良品种的培育也具有极其重要的理论和现实意义。 关键词：西洋参，功能基因，表达序列标签文库 1引言 西洋参(Panaxquinquefolium 是美国和加拿大)，上世纪八十年代我国引种栽培成功，主要引种区域包括北京、吉林、陕西、山东等地 n1。西洋参具有促进记忆、抗癌、降血压、降血脂、抗缺氧和抗疲劳、抗糖尿病、强心、镇静等多种药理 作用翻，与同为五加科的名贵药材人参相比，其性较温和。现代化学及药理学研究表明西洋参含有生理活 性物质皂苷、多糖、黄酮类、挥发油、微量元素等，其主要有效成分是人参皂苷(Saponin)脚，人参皂苷含量 是衡量西洋参产品质量的重要指标。研究测定l～5年生西洋参根总皂苷含量分别为3．89％、4．33％、5．24％、 6．23％和6．49％，可见，西洋参根部总皂甙含量随着参龄的增长而增加嗍，四年生西洋参根中总皂甙含量已 达较高水平。 由于受自身的生理特性限制，西洋参生长缓慢，一般需四至六年才能收获人药，随着对西洋参需求的 9 增加，可供利用的资源已严重不足，而且西洋参存在连作障碍，20年内不能重茬，适宜栽培地的缺乏制约 了西洋参产业的发展。本研究利用植物功能基因组学的技术方法，以四年生西洋参根为研究材料，构建了 西洋参根的eDNA文库，对cDNA的5’端进行测序，构建EST(ExpressedSequenceTags，表达序列标签)文库， 并进一步应用生物信息学方法进行EST的功能分类研究。试图从功能基因组水平上研究西洋参一系列重要 基因的表达及其功能，包括有效成分相关的生物合成关键酶基因、生长发育相关基因、与胁迫等相关的抗 性基因等，为解决西洋参生长缓慢、连作障碍、人参皂苷积累周期长等问题奠定基础，对西洋参优良品种 的分子设计、产业化发展、满足人们保健治疗需求具有重要意义。 2材料和方法 2．1实验材料和试剂