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2015-09-04 发布于重庆
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果树组织中总RNA提取的新方法.pdf

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果树组织中总RNA提取的新方法.pdf

沈阳农业大学学报 , 2002 - 04 , 33 (2) :122 - 125 Journal of Shen an A ricultural Universit , 2002 - 04 , 33 (2) :122 - 125 y g g y 果树组织中总 RNA 提取的新方法 1 ,4 2 3 3 2 2 4 侯义龙 , 张开春 , 吴禄平 , 胡文玉 , 林珂 , 冯晓元 , 邢福有 ( 1 中国科学院沈阳应用生态研究所, 辽宁沈阳 110015 ; 2 北京市林业果树研究所 , 北京 100093 ; ) 3 沈阳农业大学 , 辽宁沈阳 110161 ; 4 大连大学生物工程学院 , 辽宁大连 116622 摘要 : 本研究设计了一种新的 RNA 提取方法 , 解决了 RNA 提取时容易被降解和污染这一关键问题。通过加入 Rnase 抑制剂 , ( - 1 ) 消除了同外源 RNase 对 RNA 的降解 , 结合 DNA 难呈低盐溶液 140mmol ·L NaCl 的原理 , 去除了 DNA 对 RNA 提取液的污染 ; 先后使用酚和氯仿 , 有效地去除了蛋白质和酚类物的污染 , 利用抗氧化剂 PVP 和巯基乙醇 , 消除了内源酚类物质氧化变色对病毒 RNA 逆转录的影响。采用上述方法可以在 4～5h 内得到纯度高、含量大、完整性好的果树总RNA , 并获得了逆转录活性较强的病毒 RNA , 同时使提取 RNA 的成本降低。这些方法对苹果、葡萄、桃、樱桃等果树总RNA 的提取均适用。关键词 : 果树组织 ; 逆转录 ; 聚合酶链式反应 ( ) 中图分类号: Q783. 2 ; 文献标识码 : A 文章编号 : 1000 - 1700 2002 02 - 0122 - 04 Ne w Methods for Total RNA Extraction in Fruit Trees HOU Yi - ling1 ,4 , et al. ( ) 1 , 4 Colle e Bioen ineerin o Dalian Universit , Dalian 11662 , China