树木的组织细胞培养.pdfVIP

树 木 的 组 织 细 胞 培 养 大山胜夫 应用生物工程，在生物领域 内，已广泛 出 。 开展，在农业上不仅开发了基 因重组、细胞 (2)茎顶和腋芽 融台等新的育种技术；而且开发了利用组织、 由生长旺盛的新枝顶端部割取茎尖 (4～ 细胞培养大量生产种苗的技术。在木本植物 5cm)，用次亚氯酸钠溶液浸渍2O分钟 杀 菌， 中，分别利用各种各样的外植片，诱导不定 并用蒸馏水清洗三次，然后，在解 剖显微镜 芽和不定根，从而获得再生个体j被子植物 下，用小刀和镊子，取除未展开叶，挖出约 中至少 已有37种，裸子植物中也有18种，但 1ram左右 的芯芽 。如果用靠近新枝顶端部的 其频度还相当低。最近，在被子植物中，用 腋芽，则可将带一部分茎的小 片作为外植片 。 柑桔 由其愈伤组织，以相当高的频度获得不 如果用枝条基部边的腋芽，则采用与冬芽一 定胚的形成 。日本大山等用桑芽 由萌芽胚轴 样的方法，经杀菌处理后，去除鳞片，挖出 作为外植片，在添加尿素系统细胞分 裂 素4 芯芽，作为外植片 Pu的Murashige-Skoog(Ms)培养基进行 培 2．准备培养基和培养 条件 养，发现在切 口四周形成许多不定芽。 培养各种分离芽，以MS基本培养基 加 生长点分裂组织培养，就是利用包含预 BAlnig／1为适宜。培养容器用长颈瓶 (100m1) 先分裂组织的外植片。如茎尖、休眠芽、茎 圆锥形烧杯 (20Ora1)，或试管 (~25mm×120 的一部分(包含腋芽)等。其优点是培养经过 mm)，分别注入培养液30ml或20mI，用铝 箔 时间短，缺点是增殖率不高。下面介绍桑生 密封其上端后 }再用高压灭菌器，在120℃下 长点分裂组织培养技术。 15分钟进行杀菌处理。 1．材料和外植 片的 备 培养条件，保持温度28℃，白天光色，采 (1)冬芽 用 白色荧光灯 ，每 日照 明10～12小 时(4000 桑芽通常到9月下旬～12月下旬时，为 自 Iux)。 发休眠，其后转变为称他发休眠的状态 在 3．分 离茅的营养要求 1～2月严冬期，剪取上年生长的枝 (老枝)，保 桑分离芽的生长培养液组成： 湿贮藏在2℃左右的低温室 内，供随时需用。 (1)无机盐 冬芽 的分离方法，先将枝条 以长约3～4cm 小 分离芽在MS基本培养基的各种无机 盐 心切断，用中性洗涤剂，仔细洗净，再在4 组成浓度中都能 良好发育。以氮素源来看 ，除 的次亚氯酸钠溶液中浸渍3O分钟，进行表面 加硝酸钾外 ，同时加硝酸铵 比单独加硝酸钾， 杀菌。但如果是用经过长期贮藏的枝条时，要 要适合分离芽发育。 稍延长浸溃时间。然后，将杀菌过的枝条 的 碳素源改供保持培养基的渗透压 ，又是 小片，用纱布包裹，露出冬芽。再用镊子和 重要的能源。一般在植物的组织培养 中，应 小刀，去除鳞片，控出芯芽，作为外植片。 用庶糖和葡萄糖；果糖则效果不好 。可是 ，对 其 大小2~4mm，生长点和未展开叶 在 托 叶 桑分离芽