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PCR技术的研究进展 【摘 要】 【关键词】 【中图分类号】 【文献标识码】 【文章编号】 PCR是聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction)的缩 顺序表达，因此研究这个过程中基因表达的变化是揭示生长 写，是一种在生物体细胞外通过酶促合成特异DNA或DNA片段 发育机理的重要手段。定量RT-PCR（定量逆转录PCR）是研究 的方法，又称多聚酶链反应、无细胞克隆技术等。PCR技术主 植物基因表达水平变化的一项重要技术。通过研究不同植物 要由高温变性、低温退火和适温延伸3个步骤反复的循环构 或同意植物不同发育时期的基因表达水平来揭示植物生长发 成，是在一种特异耐热酶－Taq DNA聚合酶的催化下完成的由 育的机理。如Isono利用实时荧光定量反转录PCR研究叶绿体 DNA聚合酶催化反应。其基本原理是用寡聚核苷酸引物结合在 成熟度与其基因组拷贝数的关系，发现子叶出现以后，叶绿 模板DNA (或靶DNA)分子上进行特异核苷酸序列扩增。按理论 体基因拷贝数显著增加，进而把光诱导的叶绿体成熟过程与 计算，一般DNA短链经过20次PCR循环将产生约100万倍的扩增 叶绿体的基因拷贝数联系起来。 产物。自1985年美国PE－Cetus公司的Mullis及其同事研制成 3.PCR在作物抗病性基因分析、定位中的应用 功后，它以惊人的速度被广泛应用农业、食品工业、医学及 在作物病害研究中，作物抗病性及其机制研究一直是当 分子生物学等各个领域。 今作物病理学和作物抗病育种中的热点和焦点问题。而我们 目前，常用的几种PCR主要有定量PCR、抗原捕获PCR (AC 现在已经知道作物对病原物的抗性是由相对的基因所控制 —PCR)、不对称PCR (Asymmetric PCR)、彩色PCR (CCA-PCR)、 的，即被广泛认可的基因对基因理论。因此，寻找与作物抗 原位逆转录PCR(In Situ RT-PCR)、逆转录PCR(RT-PCR)、反 病性紧密连锁的基因标记，即将抗病性基因进行定位的研究 向PCR(inverted PCR)、膜PCR (membrane-bound PCR)和间接 中具有十分重要的理论意义和实践意义。利用PCR和RAPD技术 原位PCR(Indirect In Situ PCR)等。由于PCR检测具有高效、 能够找到与抗性紧密连锁的分子标记，并将其进行定位。如 灵敏，特异性强等优点，它比传统方法更有优势，20多年来 我国的朱立煌等(1994)以籼稻窄叶青8号／粳稻京系l7的双 该技术在生物学等各个研究领域均发挥了重大的作用，本文 单倍体(DH)群体为基础，利用RAPD技术，发现了与稻瘟病抗 主要对PCR技术在农业、食品工业和医学三个领域的主要应用 性基因连锁的分子标记，且分子标记和抗性基因定位在第8染 和研究进展进行综述。 色体上。这无疑为水稻抗稻瘟性基因的精细作图和标记辅助 （一）PCR 技术在农业中的应用 选择及克隆抗瘟性基因的深入研究奠定了基础，从而为分子 PCR技术在农业上主要用于基因表达的定性和定量检测， 生物学在抗稻瘟病育种应用上提供了宝贵的材料。 在农业中的应用越来越广泛，主要用于转基因产品检测、目 （二）PCR 技术在食品科学中的应用 标